苯丙氨酸解氨酶（PAL）

簡介

苯丙氨酸解氨酶（PAD 對植物體的木質素、植保素、類黃酮、花青素等次生物質 的形成起重要的調節作用，且與植物的抗病作用有一定的關系。本實驗了解測定苯丙氨酸解 氨酶活性的原理和方法。

原理

苯丙氨酸解氨酶是植物次生代謝中的一個關鍵酶。它催化 L-苯丙氨酸的脫氨 反應. 釋放氨而形成反式肉桂酸。根據產物反式肉桂酸在波長 290 nm 處吸光度的變化，可以 測定該酶的活性。

材料與儀器

1 . 材料：黃化水稻幼苗。

2. 試劑。0. 1 mol - L】硼酸緩沖液（pH 8. 8）；0. 02 mol - L 1 L-苯丙氨酸：稱取 3.33 g L-苯丙氨酸溶于 1 000 mL 0. 1 mol?L"1 硼酸緩沖液（pH 8. 8）；7 mmol - 統基乙醇硼酸 緩沖液：0. 11 mL 藐基乙醇用 0. 1 mol?L-1 硼酸緩沖液溶解，并定容至 200 mL；聚乙烯毗咯 烷酮（PVP）。

3 . 器材：冷凍高速離心機，紫外-可見分光光度計，旋渦混合器，恒溫水浴鍋等。

步驟

1. 酶液制備：稱取黃化水稻幼苗 0.5 g, 先加 1.5 mL 預冷的提取液（即 7 mmol - L-1 蔬 基乙醇硼酸緩沖液）、過量的聚乙烯毗咯烷酮（PVPX 但不能太多，否則不易研磨）、少量石英 砂在冰浴下研磨成漿，再加 3.5 mL 預冷的提取液使其終體積為 5 mL。于 12 000 g 4°C 下離 心 15 min, 用吸管吸取上清液，即粗酶液。

2. 酶活測定：

反應液包括：①0.02 mol - L_1 L-苯丙氨酸 1 mL；

②0.1 mol - L 1 硼酸緩沖液（pH 8. 8）2 mL；

③0.1 mL 粗酶液。

（對照以 0. 1 mL 疏基乙醇緩沖液代替酶液）
反應液用渦旋混合器混勻后立即在 290 nm 處測起始吸光度值，并精確計時。（每一樣品 重復兩組）將測定后的各管于 30 °C 水浴保溫 30 min, 再于 290 nm 處測定各管的吸光度值。 本實驗以每 30 min 在波長 290 nm 處吸光度值增加 0. 01 所需酶量為 1 個單位（U）。
苯丙氨酸解氨酶活性（U - g '鮮重）= 3。min 2 就鷲 ［X V
a A W X U. U1
式中 s 一測定時的酶液用量，mL；
V—酶液總體積，mL；
W—樣品重，g。
（苯丙氨酸解氨酶活性也可以 U ? mg" 1 蛋白表示. 蛋白質含量可用考馬斯亮藍 G-250 法 測定，以牛血清白蛋白作標準）。

注意事項

要求分光光度計有準確的波長。

常見問題

苯丙氨酸解氨酶與植物的抗病作用有何關系？