植物組織中酚類物質含量的測定

簡介

植物組織中的酚類物質在多酚氧化酶的催化下被氧化為醍，醍可自動聚合成有 色物質，發生褐變。因此，對植物組織內酚類物質進行定量測定具有一定意義，是植物抗性生 理研究中經常用到的一個指標。本實驗的目的在于學習測定酚類物質含量的原理及方法。

原理

植物組織中酚類物質含量的測定的基本原理是酚類物質含量測定常采用 Folin-酚法。酚類物質在堿性條件下可與 Folin-酚試 劑中的磷鴇酸和磷鑰酸反應生成鴇藍和鑰藍化合物，該物質在 700 nm 處有最大光吸收，其吸 光度的大小與酚類物質的含量成正比。因此，通過測定吸光度的大小即可測定植物組織中酚 類物質的含量。

材料與儀器

材料：各種植物組織。

儀器: 分光光度計，離心機，研缽，試管，試管架，移液管等。

試劑：

(1)Folin-酚試劑：稱取鎢酸鈉 25 g 和磷鉬酸 5 g, 放入回流瓶中，加 12.5 mL 磷酸和 188 mL 蒸餾水，一起回流煮沸 2 h, 冷卻后用蒸餾水定容至 1 000 mL。

(2)10% Na2CO3：稱取 10 g Na2CO3 溶于 100 mL 蒸餾水中。

(3) 標準酚溶液：0.45 mmol L-1鄰苯二酚溶液。

步驟

植物組織中酚類物質含量的測定的基本過程可分為如下幾步：

1 . 酚類物質的提取：稱取 1 g 植物材料，加少量水研磨成勻漿，充分洗滌研缽，定容至 100 mL。用時可適當稀釋。

2. 標準曲線的制作：按表 56-1加入各種試劑，混勻，3 min 后加 10% Na2CO3 2 mL, 振搖，室溫下靜置 1 h 后測定其在 700 nm 處的吸光度。以酚溶液濃度為橫坐標，吸光度為縱坐 標，繪制標準曲線。

表 56-1 標準曲線制作加樣表

3. 樣品酚含量的測定：將提取液適當稀釋，吸取 2 mL 置于試管中，加 2 mL Folin-酚試 劑，3 min 后加 10% Na2CO3 2 mL, 振搖，室溫下靜置 1 h 后測定其在 700 nm 處的吸光度，在 標準曲線上查出對應的酚濃度。

4. 結果計算：

式中：c 一為從標準曲線上查得的酚濃度，μmol?mL-1；

V—為樣品體積,mL；

W —為樣品質量，g。

注意事項

酚類物質提取時避免被氧化。