高粱籽粒中單寧含量的測定

簡介

單寧通常被認為是一些水溶性的多酚類化合物，其分子質量為 500?3 000 ku0 單寧除了具有酚類化合物的性質以外，還能沉淀生物堿、明膠和蛋白質等。單寧存在于許多 植物的根、莖、葉、花和果實中，且與水果成熟前后的澀味密切相關。同時也發現在大麥、小麥 和多種食用豆類作物的籽粒中也含有單寧。測定單寧含量可以了解果蔬、作物品質。

原理

高粱籽粒中單寧含量的測定的基本原理是根據單寧含有能還原磷鴇鑰酸的芳香族羥基，在碳酸鈉介質中，能將顯色劑的 6 價鴇（鑰）還原成 5 價，顯現出鈣（鑰）深藍色，其顏色深淺與單寧的含量成正比。本實驗浸提 高粱中的單寧類化合物，在碳酸鈉溶液中，與磷鴇鑰酸反應，產生深藍色物質，測定單寧的 含量。

材料與儀器

1. 材料：高粱籽粒。

3. 器材：恒溫水浴，恒溫箱，容量瓶，離心機，移液管，燒杯. 漏斗，分光光度計。

2. 試劑：

（1） F-D（Folin-Denis）試劑：1 000 mL 燒瓶中加 750 mL 蒸偕水，再加入 Na2WO4 ? 2 H2O 100 g、磷鑰酸 20 g 及 H3PO4（85%）50 mL, 用橡皮塞塞緊，塞中插一支干凈的長 50?100 cm 細玻璃管, 玻璃管下端插入溶液，將燒瓶置于可調電爐上（加石棉網），并固定在鐵架上，溫火 煮沸回流 2 h, 冷卻后用蒸偕水稀釋至 1 000 mL。

（2） 飽和 Na2CO3 溶液。

（3） 0.1 mg - mL?單寧酸貯備液：精確稱取單寧酸 10 mg 溶于蒸饞水，然后定容至 100 mL, 現用現配。

步驟

高粱籽粒中單寧含量的測定的基本過程可分為如下幾步：

1. 標準曲線的繪制：吸取新配制的 0.1 mg - mL-1 的單寧酸貯備液 0、1.0、2.0、4.0、6.0、 8.0 mL 分別裝于 100 mL 容量瓶中，然后加入 5 mL F-D 試劑及 10 mL 飽和 Na2CO3 溶液， 蒸餡水定容至 100 mL, 并充分搖勻。30 min 后，用分光光度計在 760 nm 波長處讀取光密度 值。以光密度值為縱坐標，單寧酸量為橫坐標，繪制標準曲線。

2. 樣品提取：手工精選整粒高粱樣品，除去穎片、碎粒及雜物。稱取樣品 5 g, 裝于 100 mL 燒杯中，加水約 50 mL, 放在 60°C 左右的保溫箱中過夜。第二天，將上清液過濾至 250 mL 容量瓶中，然后再加入約 40 mL 80°C 左右的蒸餡水，置于 80°C 水浴中浸提 20 min, 將 濾液過濾至上述 250 mL 容量瓶中，如此反復 3?5 次，直至提凈為止（檢查方法：最后一次濾液與 FeCl3 稀溶液混合不再產生綠色或藍色）。最后定容至 250 mL, 搖勻。

3. 樣品測定：取出一部分浸提液離心，吸取 1 mL±清液，置于預先盛有 70 mL 蒸偕水的 100 mL 容量瓶中，加入 5 mL F-D 試劑及 10 mL 飽和 Na2CO3 溶液，蒸儒水定容至 100 mL, 并充分搖勻。30 min 后. 用分光光度計在 760 nm 波長處讀取光密度值。

4. 結果計算：
單寧含量=霽■陽 XI。。％
式中：A—從標準曲線查得的單寧酸量，mg；
W—樣品重，g。

注意事項

1. 使用碳酸鈉時，如果顯色液出現乳白色渾濁或者沉淀，比色前應離心。

2. 若改用 NaOH 做介質時，也要消除渾濁、沉淀現象。