植物生物堿含量的測定

簡介

生物堿是指天然的含氮有機化合物，但不包括氨基酸、蛋白質、核昔、葉咻、膽堿 甲胺等開鏈的簡單脂肪胺。它的氮原子常在環上，生物堿多具有復雜環狀結構和較強的生理 活性。植物中的生物堿大多有明顯的生理活性。如抗菌消炎、鎮痛止喘、抗癌活性、抗中毒性 休克作用等作用，常常作為藥材使用。測定植物的總生物堿的含量有助于控制中藥材的質 量、反映藥材的療效，以及為保健食品、天然防腐劑的開發提供很好的應用基礎研究。

原理

植物生物堿含量的測定的基本原理是生物堿大部分溶于有機溶劑，只有少數可溶于水。在植物體內常與酸結合成鹽, 所以提取時應先將植物材料與少量堿混合（如 10% 氨水），使生物堿轉成游離狀態后用有機溶 劑提取。測定的方法主要有滴定法（直接滴定法和回滴法）、酸性染料比色法和導數分光光度 法。酸性染料比色法在文獻中采用較多，被認為是較理想的方法。文獻中采用的染料有嗅甲 酚綠、嗅甲酚藍等，緩沖液也有多種。本實驗采用分光光度法，以荷葉為例，以漠甲酚綠緩沖 液為顯色劑，以荷葉堿為對照，測定荷葉中總生物堿的含量。

材料與儀器

材料: 荷葉（市售）等植物材料。

器材：可見一紫外分光光度計，電子天平,R201 型旋轉蒸發儀。

試劑：

①荷葉堿對照品

②乙醮

③三氯甲烷

④漠甲酚綠

⑤鄰苯二甲酸氫鉀

⑥氫氧化鈉（市售分析純）

步驟

植物生物堿含量的測定的基本過程可分為如下幾步：

1 . 對照品溶液的制備：精密稱取荷葉堿約 10 mg, 置于 25 mL 容量瓶中，加三氯甲烷至刻 度，搖勻，精密吸取 2.5 mL 于 25 mL 容量瓶中，加三氯甲烷至刻度，搖勻，備用。

2. 供試品溶液的制備: 取粉碎到一定程度的荷葉粉末適量，用 pH 為 3?4 的鹽酸水溶液 恒溫提取 10 h, 過濾，得紅棕色稍黏稠的濾液，第一次濾液真空濃縮到一定體積，再過濾，得到 的第二次濾液用氯仿萃取兩次，以除去脂肪炷及樹脂類雜質，水層調 pH 至 6?7 過濾以除去 糅質及靴酸鹽類雜質，繼續加堿液至 pH 為 9 左右即得荷葉生物堿提取液，經旋轉蒸發儀蒸 發濃縮成 10 mL 濃縮液，待用。

或者取荷葉，粉碎成粗粉，精密稱取約 4 g 于索氏提取器中，加入 80 mL 三氯甲烷，加熱 回流提取 4 h, 冷卻后過濾，蒸干，殘渣加三氯甲烷分次溶解移入 100 mL 容量瓶中，加三氯甲 烷至刻度，搖勻，精密吸取 1 mL 于 25 mL 容量瓶中，加三氯甲烷至刻度，搖勻，備用。也可以 超聲波提取，較好的提取條件為 65% 乙醇、料液比 1 : 50（m/V）.pH 5、超聲頻率 45 kHz、超聲時間 0.5 h、超聲溫度 80°C。

3. 漠甲酚綠緩沖液的制備：精密稱取漠甲酚綠（別名：漠甲酚藍）125 mg, 用 0.2 mol - L 1 NaOH 溶液 12.5 mL 溶解. 加入鄰苯二甲酸氫鉀 2. 50 mg, 加少量水溶解，轉移至 250 mL 容量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。（注：0.05% 漠麝香草酚藍緩沖液可替代）

4. 標準曲線制作：分別精密吸取 0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL 對照品溶液于試管中（或 5 mL 容量瓶），加三氯甲烷至 5 mL, 振搖，移至分液漏斗中，精密加入漠甲酚綠緩沖液和 0.2 mol - L 1 NaOH 溶液各 1 mL, 搖勻，靜置，取澄清的三氯甲烷液在 415 nm 波長處進行 測定，以濃度為縱坐標，吸收值為橫坐標，得回歸方程迎=Ar+B0

5. 荷葉總生物堿的測定：取三批荷葉，以三氯甲烷加漠甲酚綠緩沖液和 0. 2 mol ? L 1 NaOH 溶液為空白，按照 4 標準品含量測定程序，比色結果代入回歸方程，計算樣品荷葉總生 物堿含量。

6. 結果計算：

c X V

生物堿含量（卩 mol?g?）= —

式中：c 一從標準曲線上查得的生物堿濃度，卩 mol - mL'1；

V 一樣品體積,mL；

W—樣品重,go

注意事項

1. 不同植物的生物堿種類不同，其提取方法應有所區別。

2. 如果選取的顯色染料不同，測定波長需要重新掃描。