Southern印跡技術
簡介
印跡雜交是指將待測核酸片段結合到一定的固相支持物上,然后與存在于液相中的標記探針進行雜交的過程。Southern印跡技術(Southern blot)是將DNA轉移到固相支持物上,然后與存在于液相中的標記探針進行雜交的過程。
Southern印跡技術可檢測特定大小DNA分子的含量,常用于克隆基因的酶切圖譜分析、基因組基因的定性及定量分析、基因突變分析及限制性長度多態性分析(RELP)等。
原理
Southern印跡技術的基本原理是首先將限制性核酸內切酶消化的DNA片段經凝膠電泳分離,然后使凝膠上的DNA變性,并在原位將單鏈DNA片段轉移至硝酸纖維素膜或其他固相支持物上。
通過用放射性同位素標記特異的DNA探針,與單鏈DNA片段進行雜交反應,經放射性自顯影,分析雜交信號,確定與探針互補的每條DNA帶的位置,從而可以確定在眾多酶解產物中含某一特定序列的DNA片段的位置和大小。
應用
Southern印跡技術可檢測特定大小DNA分子的含量,常用于克隆基因的酶切圖譜分析、基因組基因的定性及定量分析、基因突變分析及限制性長度多態性分析(RELP)等。