反應時間對產物形成的影響實驗
原理
酶反應的時間進程曲線的起始部分在某一段時間范圍內呈直線，其斜率代表酶反應的初速度。隨著反應時間的延長，曲線斜率不斷減小，說明反應速度逐漸降低，這可能是因為底物濃度降低和產物濃度增高而使逆反應加強等原因所致，因此測定準確的酶活力，必須在進程曲線的初速度時間范圍內進行，測定這一曲線和初速度的時間范圍，是酶動力學性質分析中的組成部分和實驗基礎。
材料與儀器
蔗糖
乙酸緩沖液 葡萄糖 二硝基水楊酸溶液
分光光度計 水浴鍋 試管 保鮮膜
步驟
1 .準備12 支試管，按表2 進行測定。用反應時間為0 的第一管作空白對照, 此試管要先加0.1 mol/ L NaOH 后加酶。第10支試管是校正蔗糖的酸水解。用第11 管作為對照，測定第12 管葡萄糖標準的光吸收值，用以計算第2～9 各測定管所生成還原糖的μmole 數。
2 .表2 中底物蔗糖的量為每管0.25 μmol 全部反應后可產生0.5 μmol 的還原糖，所有的蔗糖和酶濃度應使底物在20 min 內基本反應完。
3 .畫出生成的還原糖的 μmol 數（即產物濃度 μmol/ ml）與反應時間的關系曲線，即反應的時間進程曲線，求出反應的初速度。
