血糖測定實驗

原理

血糖中β－Ｄ葡萄糖在葡萄糖氧化酶催化下，氧化成葡萄糖酸，并產生過氧化氫，過氧化氫在過氧化物酶催化下，氧化氧的受體——鄰聯甲苯胺產生有色化合物。在有足夠的葡萄糖氧化酶和過氧化物酶存在下，形成有色化合物的量和葡萄糖的量成正比，并在625 nm處有最大吸收。

材料與儀器

葡萄糖
鄰聯甲苯胺 醋酸 葡萄糖氧化酶 辣根過氧化酶
試管 試管架 吸量管 722S分光光度計

步驟

溶液配制：
1. 1％鄰聯甲苯胺溶液：1 g鄰聯甲苯胺溶于100 ml無水乙醇，于棕色瓶保存。
2．醋酸緩沖液（ｐH 5）：300 ml 0.15 mol/L醋酸（8.7 ml冰乙酸定容至1 L），700 ml 0.15 mol/L醋酸鈉混合后調ｐH 至５（用氫氧化鈉或鹽酸）。
3．葡萄糖氧化酶，辣根過氧化酶：10 mg溶于10 ml水中，放于4 ℃保存。 
4．含鄰聯甲苯胺試劑：150 mlpH5醋酸鹽緩沖液，1 ml葡萄糖氧化酶溶液，1 ml過氧化物酶，1 ml 1％鄰聯甲苯胺溶液，混合后保存在4 ℃下，可存放7周。
5．標準葡萄糖溶液：100 mg干燥的葡萄糖溶于100 ml 0.3%安息香酸溶液（安息香酸0.3 ｇ溶于100 ml水），成1 mg/ml。

實驗操作：
取三支試管，按如下順序操作：

空白管蒸餾水                                      1 ml
標準管標準葡萄糖溶液                      1 ml
測定管待測樣品(無蛋白血濾液)       1 ml

待測樣品含糖控制在400～600 μg/ml。每隔半分鐘依次向各管加入含鄰聯甲苯胺試劑5 ml，立即混合并準確反應10 min（夏季反應時間可縮短），在波長625 nm處，每隔半分鐘分別讀取光密度值，以空白作為比色時的對照。

按下列公式計算：