總糖含量的測定實驗

原理

苯酚-硫酸試劑可與游離的或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸（或甲苯衍生物）起顯色反應，己糖在490 nm處（戊糖及糖醛酸在480 nm）有最大吸收，吸收值與糖含量呈線性關系。

材料與儀器

葡萄糖
濃硫酸 苯酚
試管 試管架 移液管 量筒 燒杯 離心管 玻璃碾磨器 離心機 分光光度計

步驟

1. 材料的處理:將0.5～1 g所測的材料搗碎，用適量蒸餾水、玻璃碾磨器碾磨并分次抽提，混合液離心得抽提液即樣品液。
2. 標準曲線制作:取50 μg/ml的己糖標準溶液0 ml，0.1 ml，0.2 ml，0.3 ml，0.4 ml，0.5 ml于試管中，用水補足到0.5 ml，加0.3 ml 5%酚溶液，混勻后快速加入1.8 ml濃硫酸，振蕩混勻，室溫放置20  min即可出現橙黃色，以第一管調零點，可于490 nm處比色測定讀OD 值。以糖含量為橫坐標，相應的 OD 值為縱坐標，繪制標準曲線。
3. 樣品含量測定:取0.5 ml內含2～25μg糖量，同樣加入0.3 ml 5%酚溶液，混勻后立刻沿管壁加入濃硫酸1.8  ml，振蕩混勻，達室溫后，可測490 nm處的 OD 值，從標準曲線上查相應糖含量。

注意事項

1. 幾種己糖測定方法中所使用的顯色劑，如蒽酮、間苯二酚等，都需要沸水浴加熱，而本法不需要，且蛋白質的存在對本法的顯色反應影響不大，故也可用于糖蛋白中的己糖測定。除此之外，還可用于己糖甲基化衍生物和6－脫氧核糖、戊糖的測定。
2. 本法的熱量來自濃硫酸與水的混合，因此加濃硫酸時反應快，且立即混勻，試管應大一些，以免燙手。