測定氨基糖苷類抗生素的殘留量實驗
材料與儀器
動物組織
磷酸鹽緩沖液 乙酸 甲醇
SPE柱 離心管
步驟
1. 前處理
稱取2 g樣品于50 mL聚丙烯離心管，加入3 mL磷酸鹽緩沖液（10 mmol/L KH2PO4含0.4 mmol/LEDTA和2%三氯乙酸），均質（30～60 s）。塞緊，激烈振蕩l0 min。在4000 r/min下離心10 min。將上清液轉入另一離心管，殘渣中加入10 mL磷酸鹽緩沖液/TAC，混合，激烈振蕩l0 min。離心，合并上清液。將合并的上清液用30%NaOH調節pH至7.5～8.0。離心，如需要可用角匙去掉上面的脂肪。
SPE（BakerBondSPEWidePoreCB，500 mg）柱凈化：將SPE柱裝好后，用 5 mLMeOH和5 mL水淋洗。加入樣品使流速為1～3 mL/min，用4～5 mL水淋 柱，抽干5 min。氨基糖苷類抗生素用3 mLl0%乙酸/甲醇洗脫1l5 mL玻璃離心管。在40 ℃下用氮氣濃縮至約0.1 mL，在室溫下用氮氣吹干。加入0.4 mL5 mmol/L HFBA，混合后超聲15 min，在2500 r/min下離心10 min，轉入另一0.6 mL聚丙烯離心管，在16000 r/min下離心10 min。小心移出大約一半上清液自動進樣瓶。
2. 儀器條件
色譜柱：內徑為2.1mm，長100mm的反相C18，3.5um粒徑；
流動相：流速0.15 mL/mm，初始5%MeOH，75%水，20%100 mmol/LHFBA。
