HRP顯色

顯色（HRP酶）

1．增強化學發光法(ECL)

Ecl 顯色原理：氨基苯二酰肼類主要是魯米諾及異魯米諾衍生物，是最常用的一類化學發光劑。魯米諾（luminol，5＇-氨基-2，3-二氫-1，4-酞嗪二酮）的分子結構及化學反應式如下：

魯米諾在免疫測定中既可用作標記物，也可用作過氧化物酶的底物。在Ecl底物中，含有H2O2和魯米諾，在HRP（辣根過氧化物酶）的作用下，發出熒光來。

步驟

試驗步驟：

1）將兩種顯色底物1：1等體積混合（一般各1ml/membrane）。

2）將混合物覆蓋在膜表面，1-2分鐘，搖晃使均勻。

3）用保鮮膜把膜包起來，放入夾板中。

4）在暗室中將X光片，覆蓋在膜的上面，夾好夾子，曝光1min。

5）顯影、定影。

6）根據結果調整曝光時間和曝光區域，得到最佳結果。

注意：熒光在一段時間后會越來越弱。

2.DAB顯色

DAB（3,3二氨基聯苯胺）和HRP反應產生棕色的不溶終產物。這種棕色沉淀不溶于酒精和其它有機溶劑，對于必需使用傳統復染和封固介質的免疫組化

對于AP標記的二抗我們選用BCIP and NBT 顯色，它們在堿性磷酸酶（AP）作用下反應可生成一種不溶性黑紫色沉淀的強信號。