細胞生長緩慢、污染、不貼壁情況怎么處理?
細胞培養-細胞計數詳細步驟及方法
在細胞培養之中,細胞計數是一項基本技能。對于我們這些剛剛進入實驗室做細胞實驗的人來說,最麻煩的事情就是細胞計數。雖然它相對簡單,但我們經常會頭暈和失明。此外,如果一個人被別人打斷,他的工作每分鐘都會被浪費。事實上,我認為細胞計數如此困難的很大一部分原因是我沒有掌握正確的 在我們日常實驗中,細胞實驗是每一個課題都必不可少的一部分。但作為一個科研小白,在面對細胞實驗時總是束手無策,所以我整理了常規細胞實驗技術,以供大家參考。
問題一:細胞生長緩慢
細胞長得慢是細胞培養過程中比較常見的問題,一般來說,細胞活力和濃度一直是細胞健康的標志,細胞長得慢的話,活力和濃度可能都會直線下降。
造成細胞生長緩慢的主要原因及解決方法:
1,新配置的培養基以及換了新的血清,細胞不適應;解決方法:最好使用最適宜的培養基,如果條件不允許,可以換液時不要全量換液逐漸增加新的培養基比例,1/4、1/2、3/4到1,多傳代幾次,讓細胞慢慢適應。
2,細胞密度不夠有些細胞是細胞依賴性細胞,密度過低生長緩慢;也可能是細胞分泌促生長活性物質過少,細胞連接不好等原因。解決辦法:增加細胞接種密度;將細胞從大皿轉移至小皿培養;適當增加培養基血清濃度。
3,培養環境改變細胞培養箱的溫度、CO2、細胞的生存環境要適宜,一般來說最佳溫度:是37 ℃, CO2:濃度為5% , pH:為7.2-7.4,還有滲透壓等,大家要注意調好,不要隨意改變。
4,污染,如支原體,細菌,真菌等解決辦法:細胞污染是多方面的原因,一方面要嚴格無菌操作技術、保持清潔的環境,另一方面,污染之后要及時鑒別和處理,并且,建議大家使用品質良好的細胞株和培養基,這是是減少污染的最好方法。
5,細胞本身狀態改變,如衰老等解決辦法:沒有可逆的辦法,只能及時更換新的細胞。當然如果培養細胞是原代的話,生長速度是比較緩慢的,如果沒有及時換液,營養成分不夠,細胞也會生長緩慢。用螺旋口瓶培養細胞時,需將瓶蓋微松,以保證通氣,要保持培養箱內空氣干凈等。其實只要條件適于細胞生長,細胞在自己的“小房子”里面舒適自由,那么,它一定會長得很快,并且,形態越來越“漂亮”。