血清到底需不需要滅活?
關(guān)于血清滅活的問(wèn)題由來(lái)已久。熱滅活目的是祛除血清中補(bǔ)體等對(duì)熱敏感的物質(zhì)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。很多同學(xué)找到我們,詢問(wèn)血清到底要不要滅活、如何滅活的問(wèn)題。
一、血清滅活指的是什么?
一般情況下,血清的滅活就是將解凍后的血清,通過(guò)水浴加熱的方式來(lái)處理,達(dá)到滅活補(bǔ)體的目的,溫度和時(shí)間控制在如下范圍:
56℃加熱30分鐘或40℃加熱20分鐘
因此,買到手的血清究竟要不要滅活,主要考慮血清中的補(bǔ)體對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)以及后續(xù)實(shí)驗(yàn)是否產(chǎn)生影響。所以就來(lái)簡(jiǎn)單講講,補(bǔ)體與細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)系。
二、補(bǔ)體對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的影響?
補(bǔ)體是一種血清蛋白質(zhì),存在于人和脊椎動(dòng)物血清及組織液中,不耐熱,可組成龐大的補(bǔ)體系統(tǒng),可介導(dǎo)免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞過(guò)程,刺激平滑肌收縮、細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。
因此,如果你的實(shí)驗(yàn)涉及以下這些情況時(shí),建議去除血清可能帶來(lái)的補(bǔ)體系統(tǒng)的干擾。
1免疫學(xué)研究
2誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞分化
3利用昆蟲細(xì)胞研究病毒感染
4培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞
5其他補(bǔ)體參與的細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程
血清的最佳工作溫度一般是在37℃左右,所以熱滅火對(duì)于血清而言,也是一種不小的傷害,會(huì)導(dǎo)致一些營(yíng)養(yǎng)成分流失,進(jìn)而影響細(xì)胞狀態(tài)。
那么,市面上的血清都含有補(bǔ)體嗎?都需要進(jìn)行熱滅活嗎?隨著研究的深入,網(wǎng)上也有一些人表示,胎牛血清無(wú)需熱滅活,這究竟是真是假?接下來(lái)就給大家揭示其中奧秘。
三、血清滅活疑云?
首先我們要明晰一點(diǎn),按照牛發(fā)育情況,大體上,血清可以分為胎牛血清、新生牛血清、小牛血清和成牛血清。
其中,正規(guī)的胎牛血清,要求對(duì)5-8月胎齡(一般牛在10個(gè)月左右足月,后自然分娩)的胎牛采用心臟穿刺的方法采血,隨后進(jìn)行其他制備步驟,得到胎牛血清。因此:
靠譜的胎牛血清
沒(méi)有形成一個(gè)完整的補(bǔ)體系統(tǒng),不會(huì)真正地干預(yù)免疫!
所以,網(wǎng)傳的正規(guī)胎牛血清無(wú)需熱滅活的說(shuō)法,是正確的,正常使用即可。
四、特殊情況
但有一點(diǎn)需要注意,如果你的實(shí)驗(yàn)涉及到一些其他特殊的神秘活性物質(zhì),必須要滅活,根據(jù)血清廠家多年來(lái)總結(jié)的經(jīng)驗(yàn),常規(guī)解凍后,40℃水浴加熱20分鐘即可,能夠最大程度地保留營(yíng)養(yǎng)成分。