97久久国产成人免费网站-色欲色欲久久综合网-韩国精品一区二区三区无码视频-在线看片免费人成视频影院看-国产成人a人亚洲精品无码

服務熱線:13718308763 13718987307       E-mail:Tianyoubzwz@163.com
中國微生物菌種

標準物質查詢網
China microbial strains and
reference materials query network
會員登錄 會員注冊
我已閱讀并同意《服務協議》
注冊
人腎皮質近曲小管上皮細胞系HK2培養
發布日期:2024-10-14 09:04:32


人腎皮質近曲小管上皮細胞系HK2培養


  人腎皮質近曲小管上皮細胞系HK2,該細胞屬源于正常腎的近曲小管細胞,通過導入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉染外生包裝細胞Psi-2,Psi-2細胞產生的病毒再去感染兼嗜性包裝細胞系PA317,最后將PA317產生的病毒顆粒導入正常的腎皮質近曲小管細胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性,但未用G418篩選轉導克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2細胞來源于單克隆。PCR檢測證實HK-2細胞基因組中含有E6/E7基因。 HK-2的生長依賴于表皮生長因子EGF,保留了良好的PTCs的表型。 陽性表達:堿性磷酸酶;γ-谷氨酰轉肽酶;亮氨酸氨肽酶;酸性磷酸酶;細胞角蛋白; α3β1 整合素;纖連蛋白。陰性表達:因子VIII 相關抗原、6.19 抗原和 CALLA 內肽酶呈陰性。


一、常見問題
在培養HK2細胞的時候,常會出現一些細節問題,不可掉以輕心。本文為大家總結培養HK2細胞常見的問題,以及解決方案。
01 出現空泡
空泡問題需要結合生長速度和形態來看:如果生長速度和形態正常,空泡可能是正常的細胞活動,傳代后空泡即可減輕。如果生長較慢,形態異常,空泡可能是自噬行為,可加大血清比例(不超過20%)或更換血清品牌改善細胞狀態。
02 出現拉絲
細胞伸出細長的絲有兩種情況:第一種情況是HK2細胞遷移造成的,HK2細胞在培養皿上并不是靜態的,也會出現遷移。遷移時HK2細胞的一部分滯留在原處,遷移的過程中會拉出一條細長的絲。這種情況下拉絲的細胞占少數,細胞整體的生長狀態是正常的,不用特殊處理。第二種情況是營養不良,拉絲的細胞占大多數,同時細胞生長緩慢,此時可以提高血清比例(不超過20%)或添加5 ng/mL EGF。
03 形態不對
正常的HK2呈鋪路石狀生長,如果HK2細胞呈鐮刀狀或不規則狀,可能是因為培養環境發生了較大的改變,比如從有血清到無血清的轉換,此時換回原來的培養條件細胞可逐漸恢復;如果細胞變得細長,這時候可能是營養不良。
04 生長緩慢
在標準培養條件(MEM+10%FBS+1%PS),以及1:3傳代條件下,HK2細胞的傳代周期約為3天。當細胞生長緩慢,一周無法傳代時,需要考慮培養基特別是血清是否合適。選擇合適的培養基及血清,同時加大細胞接種密度可以改善。

二、培養基選擇
HK-2最初建系使用無血清培養,眾多文獻以及實踐證明MEM、DMEM或DMEM/F12添加10%胎牛血清的條件下,HK2細胞也能良好生長。但胎牛血清的質量是關鍵,胎牛血清品質越高,HK-2狀態越好。若使用無血清培養基培養,需要使用多聚賴氨酸或者明膠包被培養瓶,以促使貼壁。

主站蜘蛛池模板: 获嘉县| 淳化县| 峨山| 大兴区| 偏关县| 衡阳市| 会宁县| 枝江市| 榕江县| 宿州市| 平南县| 永靖县| 玉门市| 九寨沟县| 日土县| 绥芬河市| 垫江县| 涞水县| 谢通门县| 新乡县| 舞阳县| 西林县| 莱芜市| 贵阳市| 嘉荫县| 南皮县| 佛冈县| 青海省| 英德市| 阜平县| 石狮市| 绩溪县| 台北县| 崇州市| 嘉黎县| 柳河县| 鲁甸县| 汾阳市| 梁河县| 九寨沟县| 奉新县|