人腎皮質近曲小管上皮細胞系HK2培養
人腎皮質近曲小管上皮細胞系HK2，該細胞屬源于正常腎的近曲小管細胞，通過導入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉染外生包裝細胞Psi-2，Psi-2細胞產生的病毒再去感染兼嗜性包裝細胞系PA317，最后將PA317產生的病毒顆粒導入正常的腎皮質近曲小管細胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有新霉素抗性，但未用G418篩選轉導克隆。Southern和FISH分析顯示HK-2細胞來源于單克隆。PCR檢測證實HK-2細胞基因組中含有E6/E7基因。 HK-2的生長依賴于表皮生長因子EGF，保留了良好的PTCs的表型。 陽性表達：堿性磷酸酶；γ-谷氨酰轉肽酶；亮氨酸氨肽酶；酸性磷酸酶；細胞角蛋白； α3β1 整合素；纖連蛋白。陰性表達：因子VIII 相關抗原、6.19 抗原和 CALLA 內肽酶呈陰性。
一、常見問題
在培養HK2細胞的時候，常會出現一些細節問題，不可掉以輕心。本文為大家總結培養HK2細胞常見的問題，以及解決方案。
01 出現空泡
空泡問題需要結合生長速度和形態來看：如果生長速度和形態正常，空泡可能是正常的細胞活動，傳代后空泡即可減輕。如果生長較慢，形態異常，空泡可能是自噬行為，可加大血清比例（不超過20%）或更換血清品牌改善細胞狀態。
02 出現拉絲
細胞伸出細長的絲有兩種情況：第一種情況是HK2細胞遷移造成的，HK2細胞在培養皿上并不是靜態的，也會出現遷移。遷移時HK2細胞的一部分滯留在原處，遷移的過程中會拉出一條細長的絲。這種情況下拉絲的細胞占少數，細胞整體的生長狀態是正常的，不用特殊處理。第二種情況是營養不良，拉絲的細胞占大多數，同時細胞生長緩慢，此時可以提高血清比例（不超過20%）或添加5 ng/mL EGF。
03 形態不對
正常的HK2呈鋪路石狀生長，如果HK2細胞呈鐮刀狀或不規則狀，可能是因為培養環境發生了較大的改變，比如從有血清到無血清的轉換，此時換回原來的培養條件細胞可逐漸恢復；如果細胞變得細長，這時候可能是營養不良。
04 生長緩慢
在標準培養條件（MEM+10%FBS+1%PS），以及1：3傳代條件下，HK2細胞的傳代周期約為3天。當細胞生長緩慢，一周無法傳代時，需要考慮培養基特別是血清是否合適。選擇合適的培養基及血清，同時加大細胞接種密度可以改善。
二、培養基選擇
HK-2最初建系使用無血清培養，眾多文獻以及實踐證明MEM、DMEM或DMEM/F12添加10%胎牛血清的條件下，HK2細胞也能良好生長。但胎牛血清的質量是關鍵，胎牛血清品質越高，HK-2狀態越好。若使用無血清培養基培養，需要使用多聚賴氨酸或者明膠包被培養瓶，以促使貼壁。
