枯草芽孢桿菌感受態細胞的制備實驗-化學改進法
原理
用GM I和GM II溶液處理枯草芽孢桿菌野生型菌株BS501a，用改進的方法制備感受態細胞。
材料與儀器
野生型枯草芽孢桿菌菌株BS501a
Spizizen salts母液 CaCl2 氨基酸 GM II培養基 GM I培養基MgCl2 酵母粉 K2HPO4·3H2O 水解酪蛋白 葡萄糖 檸檬酸鈉 蒸餾水 KH2PO4 MgSO4
微孔濾膜 離心機 錐形瓶 離心管 滅菌鍋 搖床
步驟
一、實驗材料準備
1. 枯草芽孢桿菌感受態制備用貯存液
（1）10xSpizizen salts母液： 15% K2HPO4·3H2O，6% KH2PO4，2% (NH4 ) 2 SO4，0.2% MgSO4，1% 檸檬酸鈉，溶于蒸餾水中，6.6 x104 Pa高壓滅菌，室溫貯存。
（2）10% 酵母粉、1% 水解酪蛋白和25 mmo l /L MgCl2， 6.6 x104 Pa高壓滅菌， 酵母粉溶液最好現用現配，水解酪蛋白和
MgCl2溶液可室溫貯存；20%葡萄糖、0.25% 所需氨基酸和0.1 mo l/L CaCl2，用0.22 um的微孔濾膜過濾除菌，葡萄糖溶液和CaCl2
溶液室溫貯存， 氨基酸溶液- 20℃ 貯存。
2. 枯草芽孢桿菌感受態制備用培養基
（1）GM I：1mL 10 xSpizizen salts， 0.1 mL，10% 酵母粉，0.25 mL 20% 葡萄糖，0.2 mL 1% 水解酪蛋白，0.2 mL 0.25%所需氨基酸，補充滅菌蒸餾水至總體積10 mL。
（2）GM II：1 mL 10xSpizizen salts，0.05 mL10%酵母粉， 0.25 mL 20% 葡萄糖，0.04 mL 1% 水解酪蛋白，0.2 mL 0.25%所需氨基酸， 0.05 mL 0.1mo l/L CaCl2， 1 mL 25 mmo l/L MgCl2， 補充滅菌蒸餾水至總體積10mL。
二、實驗步驟
1. 挑取一新鮮培養的野生型枯草芽孢桿菌菌株BS501a菌落接種于2.5 mL GMI培養基中，30℃，130-150 r/min振蕩培養過夜。
2. 將過夜培養物按10%接種量接種于2.5 mL新鮮的GM I中，37℃，200- 230 r/min振蕩培養3.5h。
3. 再將培養物進行第二次傳代， 接種于5 mL GMII培養基中，野生型菌株BS501a按5% 接種量進行第二次傳代，37℃，200-230 r/min振蕩培養90 min。
4. 取1mL培養物，5 000 r/min室溫離心5 min，用1 /10體積上清液重新懸浮細菌沉淀，即為枯草芽孢桿菌感受態細胞。
