電轉(zhuǎn)農(nóng)桿菌感受態(tài)

原理

電擊法不需要預(yù)先誘導(dǎo)細(xì)菌的感受態(tài)，依靠短暫的電擊，促使DNA進(jìn)入細(xì)菌，轉(zhuǎn)化率最高能達(dá)到109~1010轉(zhuǎn)化子/μg閉環(huán)DNA。

材料與儀器

農(nóng)桿菌菌種
HEPES NaOH 鏈霉素 甘油
離心管 離心機(jī) 制冰機(jī)

步驟

1.  挑取單克隆接種于2 ml YEP（含50 mg/l鏈霉素）液體培養(yǎng)基，28℃，250 rpm，振蕩培養(yǎng)過夜。（如用5 mlYEP，需培養(yǎng)36 h）

2.  將菌液按1:100轉(zhuǎn)移至200 ml YEP（含50 mg/l鏈霉素）培養(yǎng)液中，28℃，250 rpm，振蕩培養(yǎng)至OD=0.3(約4~5 h)。

3.  轉(zhuǎn)入50 ml的無菌離心管，4℃，4 000 rpm離心10 min，棄上清。

4.   用20 ml冰浴的HEPES(1 mM，PH7.0)重懸。

5.  4℃，4 000 rpm離心10 min，棄上清。

6.  重復(fù)4、5步驟2~3次。

7.  用2 ml冰浴的10%甘油重懸。

8.  每管100 ul分裝于1.5 ml無菌的Eppendorf管中，-70℃保存。

注意事項(xiàng)

HEPES需現(xiàn)用現(xiàn)配。