植物組織中可溶性糖含量的測(cè)定

簡(jiǎn)介

可溶性糖多是帶有甜味的一些糖，如葡萄糖、果糖、蔗糖、麥芽糖等。可溶性糖含 量是果實(shí)品質(zhì)的一項(xiàng)重要指標(biāo)，果實(shí)成熟過(guò)程中可溶性糖含量增加。可溶性糖也是植物細(xì)胞 滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)之一，干旱條件下植物組織中可溶性糖含量增加。測(cè)定可溶性糖含量可用于分 析果實(shí)品質(zhì)，了解植物的生理狀況。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谡莆帐[酮比色法測(cè)定可溶性糖含量的原 理和方法。

原理

植物組織中可溶性糖含量的測(cè)定的基本原理是糖(sugar)在濃硫酸作用下，可經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛 或羥甲基糠醛與蔥酮脫水縮合，形成糠醛的衍生物，呈藍(lán)綠色，其吸收峰為625 nmo在一定 范圍內(nèi)，顏色的深淺與糖的含量成正比, 故可用于糖的定量測(cè)定。

材料與儀器

材料：各種植物組織，如根、莖、葉、果實(shí)、種子等。

器材：分光光度計(jì)，天平，水浴鍋，離心機(jī)或漏斗，具塞刻度試管，容量瓶，移液管等。

試劑：

①80% 乙醇

②100μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液：準(zhǔn)確稱取烘干至恒重的葡萄糖 100 mg, 用 80% 乙醇溶解后定容至1 000 mL

③蔥酮試劑：稱取蔥酮0.1 g溶于100 mL硫酸溶液（將76 mL相對(duì)密度為1.84的濃硫酸用蒸餡水稀釋到100 mL）, 貯于棕色瓶，當(dāng)日配制使用。

步驟

植物組織中可溶性糖含量的測(cè)定的基本過(guò)程可分為如下幾步：

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：取7支大試管，按表52-1添加試劑，立即搖勻，蓋上蓋子，在沸水浴中 煮沸10 min, 取出冷卻至室溫，用0管調(diào)零，在625 nm波長(zhǎng)下比色。以標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖含量作橫 坐標(biāo)，以吸光度值作縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

表52-1標(biāo)準(zhǔn)曲線制作加樣表

2. 樣品提取：將植物組織烘干、粉碎，準(zhǔn)確稱取50?250 mg, 放入具塞刻度試管中，加 80% 乙醇10?15 mL, 沸水浴提取30 min。離心后收集上清液，其殘?jiān)偌?0% 乙醇10? 15 mL重復(fù)提取2次，合并上清液。如是綠色組織，提取液需加少量活性炭于70笆下脫色、過(guò) 濾?定容至50 mL待測(cè)。如為鮮樣，稱取0.5-1 g, 加少許石英砂研磨成勻漿，連同殘?jiān)黄?用蒸餡水定容至100 mL, 室溫下浸提30?60 min, 其間經(jīng)常搖動(dòng)，離心或過(guò)濾，棄去殘?jiān)瑴y(cè) 前適當(dāng)稀釋。

3. 樣品測(cè)定：吸取1 mL提取液于大試管中，加入5 mL蔥酮試劑，搖勻，用上述同樣方 法，在625 nm處比色，記錄吸光度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出提取液中的可溶性糖含量。

4 . 結(jié)果計(jì)算：

可溶性糖含量=我貞><1。。％

式中：一從標(biāo)準(zhǔn)曲線上査得的蔗糖濃度，卩 g.mL-1 ；

V—樣品總體積，mL；

W—樣品重，mg。

注意事項(xiàng)

1. 提取可溶性糖所剩殘?jiān)旁?80°C 烘箱中烘干，可用于測(cè)定淀粉和纖維素。

2. 由于蔥酮試劑與糖反應(yīng)的呈色強(qiáng)度隨時(shí)間變化，故必須在反應(yīng)后立即在同一時(shí)間比色。