免疫印跡（immunoblotting）

簡介

免疫印跡（immunoblotting）是一種將印跡技術與抗原-抗體反應的特異性相結合的檢測技術，用于定性定量檢測生物大分子的存在、分子的大小及其與其他大分子的相互作用。免疫印跡包括蛋白印跡、DNA 印跡和 RNA 印跡，其原理近似但各有特性。其基本技術流程均包括：生物大分子的電泳分離，分離樣本的印跡（轉膜），大分子的特異性免疫檢測三個步驟。

原理

蛋白印跡（Western blotting/protein blotting）用于分離和檢測生物樣本中的某一特定蛋白，其基本原理是通過凝膠電泳分離混合蛋白質樣本，將其在特殊虹吸或電場裝置印跡（blot）至固相介質上，即將凝膠與固相介質（濾膜）貼合，可使凝膠中已分離的各蛋白條帶轉移至固相介質的相應位置；而后根據抗原-抗體特異性結合的原理，將針對特定蛋白的特異性酶聯抗體作用于濾膜，使目的蛋白與抗體特異性結合，最后利用偶聯的酶降解底物生成有色沉淀物或產生化學發光產物，從而在濾膜上顯示蛋白的存在及量。

DNA 印跡（Southern blotting）技術主要用于檢測基因組中某一特定 DNA 片段，其基本原理是首先由限制性內切酶作用于染色體基因組，獲得若干大小不一 DNA 片段，通過瓊脂糖凝膠電泳各 DNA 片段根據大小不同得以分離。在印跡裝置中，DNA 在堿性緩沖液中變性為單鏈 DNA（ssDNA），在瓊脂糖凝膠上方覆蓋一層硝酸纖維素濾膜或尼龍膜，DNA 由于毛細效應隨緩沖液向上到達濾膜，則將 DNA 條帶轉移到濾膜上。隨后以放射標記的目的基因特異性 DNA 探針與濾膜孵育，最后通過放射自顯影法使目的 DNA 條帶顯示在膠片上。隨著免疫學技術的進步，也可采用酶標抗體法檢測探針中標記的地高辛，利用酶作用于底物顯色，進而反映目的 DNA。Southern blotting 在闡明免疫球蛋白和 T 細胞抗原受體（TCR）的多樣性中發揮了至關重要的作用。

與 Southern blotting 相對應，RNA 印跡（Northern blotting）用于檢測樣本中特異性 mRNA 分子。mRNA 首先被變性成為非折疊線性形式，而后根據片段大小由凝膠電泳予以分離，而后轉移至硝酸纖維素膜上。濾膜隨之與放射標記的 DNA/RNA 探針雜交，通過放射自顯影，顯示特異性 mRNA 分子的存在。Northern blotting 技術通常用于檢測特定 mRNA 的細胞表達水平。