膠原的配制
原理
膠原是細胞生長良好的基質,它是從動物特定組織中用人工法提取出的,利于組織和細胞的固定,亦屬天然培養基。膠原主要用于細胞的附著,能改善細胞表面性質,促細胞生長。膠原可來自大鼠尾腱、豚鼠真皮、牛真皮、牛眼水晶體等,其中以鼠尾膠原最為常用和制備簡便,可配制成0.1%—1%的醋酸溶液,
材料與儀器
鼠
酒精 醋酸
離心機 冰箱
步驟
1. 取組織
取體重250 g 左右大白鼠一只,從尾根部切斷鼠尾,置75%酒精中浸泡30 分鐘;無菌條件下將鼠尾切成1.5 cm 小段,剔除皮毛,抽出尾腱置平皿中;
2. 溶解
取1.5 g 剪碎尾腱浸入150ml 醋酸溶液(0.01—0.25 M),置4℃冰箱中,并不時搖動,48 小時后,移入滅菌離心管中;
3. 分離
以4000 轉/分,離心30 分鐘,吸取上清液,10 磅10 分鐘高壓滅菌后分裝入小瓶中,-20℃冰箱保存;
4. 使用方法
用吸管吸少許膠原涂于滅菌培養瓶內壁培養面上,不宜太厚,以傾斜瓶時不流動為準;
5. 向培養瓶內通以氨氣后封上瓶蓋;
或用浸有氨水的棉球堵塞瓶口(或不用氨氣處理,而是置37℃溫箱過夜;或置室溫48 小時,再用無菌蒸餾水沖洗涼干亦可),作用30 分鐘,待膠原凝固,然后用無菌生理鹽水沖洗、涼干,即可使用。