有機磷農(nóng)藥殘留測定實驗

原理

有機磷農(nóng)藥（organophosphorus pesticides，簡稱OPPs）是含有C一P鍵或C—O—P、C—S—P、C—N—P鍵的有機化合物，目前常用的有四大類：
 

1.  磷酸酯類磷酸中3個氫原子被有機基置換后生成的化合物稱磷酸酯。
 

2.  硫代磷酸酯類磷酸分子中的氧原子被硫原子置換后生成的化合物為硫代磷酸，硫代磷酸中的氫原子被有機基取代 ，即成為硫代磷酸酯。
 

3.  膦酸酯類和硫代膦酸酯類磷酸中的一個羥基被有機基置換!即在分子中形成P—C鍵的稱為“膦酸”，膦酸中羥基的氫原子再被有機基取代即為膦酸酯，或膦酸酯中的氧原子再被硫原子取代，即為硫代膦酸酯。

4.  磷酰胺和硫代磷酰胺類磷酸分子中的羥基被氨基置換，生成磷酰胺；或磷酰胺分子中剩下的氧原子被硫原子替換，即成為硫代磷酰胺。

材料與儀器

糧谷 油籽
丙酮 二氯甲烷 氯化鈉水溶
具塞錐形瓶 抽濾瓶 凝膠色譜柱 分液漏斗 餾分收集器

步驟

1.  提取

方法1 （均質提取）稱取試樣約20 g（精確0.1 g）至于250 mL具塞錐形瓶中，加入20 mL水，混搖后放置1 h。然后加入100 mL丙酮，高速均質提取3 min。將提取液抽濾于250 mL梨形瓶中。殘渣再用50 mL丙酮重復提取一次，合并濾液，于40 ℃水浴中旋轉濃縮至約20 mL，待凈化。

方法2 （ASE快速溶劑提取）稱取試樣約20 g （精確至0.1 g）于樣品池中， 密閉，按規(guī)定的條件[ASE提取條件提取溶劑：二氯甲烷；壓力：1500 psi (l psi= 6894.76 Pa)；溫度：50 ℃ ；提取體積：60 mL；靜態(tài)時間：5 min]進行提取、凈化。

2.  液-液分配凈化

將濃縮提取液轉移至250 mL分液漏斗中，加入150 mL氯化鈉水溶液和50 mL二氯甲烷（ASE提取無需加二氯甲烷），振搖3 min，靜置分層，收集二氯甲烷相。水相再用2×50 mL二氯甲烷重復提取兩次，合并二氯甲烷相。經(jīng)無水硫酸鈉柱脫水，收集于250 mL梨形瓶中，于40C水浴中旋轉濃縮至近干，加入5 mL環(huán)己烷-乙酸乙酯（1 + 1）以溶解殘渣，并用0.45 um濾膜過濾。將5 mL待凈化液用GPC凈化。

3.  凝膠色譜凈化

合并餾分收集器中的收集液于500 mL梨形瓶中，于40 ℃水浴中旋轉濃縮至近干，加入2 mL正己烷以溶解殘渣，待SEP凈化。

凝膠色譜（GPC）條件凈化柱：700 mm×25 mm, Bio BeadsS-X3, 或相當者；流動相：環(huán)己烷-乙酸乙酯（1 + 1）；流速：5.0 mL/min；樣品定量環(huán)：5.0 mL；預淋洗體積：50 mL；洗脫體積：200 mL；收集體積：90?190 mL。

4.  固相萃取凈化

用6 mL正己烷預淋洗活性炭固相萃取柱，將樣液傾入活性炭固相萃取柱中，用2 mL正己烷洗滌，然后用20 mL正己烷-乙酸乙酯（2 + 3） 進行洗脫。收集全部洗脫液于50 mL梨形瓶中，于40 ℃水浴中旋轉濃縮至干，用正己烷溶解并定容至2.0 mL，供氣相色譜-質譜測定和確證。

5.  測定

電離方式：EI；電離能量：70 eV；測定方式：選擇離子監(jiān)測方式； 溶劑延遲：5 mD；

常見問題

多種有機磷農(nóng)藥殘留分析，目前普遍采用氣相色譜火焰光度檢測器法（GC- FPD）測定，該方法靈敏度高，分離效果好，定量準確。經(jīng)過多年實踐運用，己經(jīng)證明是一種經(jīng)典適用的分析方法。但在氣相色譜分析中，干擾物與待測物在同一根色譜柱具有相同保留時間的現(xiàn)象經(jīng)常發(fā)生，特別是對污染物的不明樣品更容易造成假陽性。因此，氣相色譜/質譜選擇離子法（GC-MSD）來進行確證是解決這一問題的有效手段。Stan報道了23種有機磷化合物的PICI和EI質譜圖，并證實了它們在食品中 ng/g量級的存在。EI方式下化合物的分子離子峰較弱，或沒有分子離子峰。在PICI方式下,與EI相比,所有化合物都有強的M+1離子峰。最近, Richardson和Seiber用EI質譜來確認接觸地亞農(nóng)和對硫磷的鴿子的肝和腎中的有機磷代謝物（二甲基磷酸酯、二乙基磷酸酯、二甲基硫代磷酸酯、二甲基二硫代磷酸酯、二乙基硫代磷酸酯、二乙基二硫代磷酸酯）的存在。這些化合物是作為丁基衍生物用GC-MS分析的。

目前國內外己有不少應用氣相色譜分析有機磷農(nóng)藥的報道，尤其對水果（蔬菜等樣品中有機磷農(nóng)藥殘留量的氣相色譜法研究較多），但有關脂肪類食品的氣相色譜法檢測方面的文獻報道較少，僅美國公職分析化學家協(xié)會制定的官方分析方法和國內衛(wèi)生部制定的國標法在測定肉（魚）中有機磷農(nóng)藥時采用了氣相色譜法。

對氣相色譜不能檢測的高沸點或熱不穩(wěn)定、易裂解變質的有機磷農(nóng)藥都可以采用HPLC法來檢測。AOAC中有近半數(shù)的有機磷農(nóng)藥都建立了HPLC法，研究報道也較多。如Paul Zavitsanos對17種有機磷農(nóng)藥LC/MS測定有機磷的條件進行了研究。