熒光光度計(jì)法測(cè)定還原反應(yīng)
材料與儀器
LDH 稀釋溶液
磷酸鉀 NADH 丙酮酸
熒光光度計(jì)
步驟
實(shí)驗(yàn)所需「試劑」具體見(jiàn)「其他」
1.98 ml 實(shí)驗(yàn)混合物
0.02 ml LDH 稀釋溶液
25℃ 時(shí),在 260 nm 激發(fā),470 nm 處測(cè)定每分鐘熒光差異。用適當(dāng)濃度范圍的 NADH 濃度對(duì)熒光強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)確定比例因子。
常見(jiàn)問(wèn)題
試劑:
0.1 mol/l 磷酸鉀 pH 7.0
0.01 mol/l NADH(71 mg 溶于10 ml H2O 中)
0.1mol/l 丙酮酸(丙酮酸鈉,Mr=110;110 mg溶于10 ml H2O 中)。
LDH 原料溶液(從豬心臟提取,例如 10 mg/ml,用 0.1 mol/l 磷酸鉀 pH 7.0 稀釋至 1 IU/ml)