硫辛酰胺的還原反應(yīng)

材料與儀器

酶樣品
磷酸鉀 NAD＋ NADH DTE EDTA DL-硫辛酰胺
分光光度計

步驟

0.93 ml 實驗混合物

0.05 ml 0.2 mol/L DL－二氫硫辛酰胺 10 mol/L

0.02 ml 酶樣品

30 ℃ 時，于 340 nm 處吸收值發(fā)生變化，ε340＝6.3×103 l/（mol·cm）。

常見問題

實驗所需「試劑」具體見「其他」

0.1 mol/L 磷酸鉀，pH 7.5

0.1 mol/L NAD＋（游離酸，Mr＝663.4；663 mg 溶于 10 ml 水中）

0.01 mol/L NADH（二鈉鹽，Mr＝709.4，71 mg 溶于 10 ml 水中）

0.1 mol/L DTE（二硫赤蘚糖醇，Mr＝154.2；或二硫蘇糖醇，DTT，Mr＝154.2；154 mg 溶于 10 ml 水中）

0.1 mol/L EDTA（Mr＝292.2；292 mg 溶于 10 ml 水中）

0.2 mol/L DL-硫辛酰胺（6，8-硫辛酰胺，Mr＝205.3；51 mg 分別溶于 1.25 ml 乙醇或者丙酮中）