測定動物組織中氯霉素及其相關化合物殘留量實驗

材料與儀器

動物組織
乙酸緩沖溶液 葡萄糖醛酸酶 蛋白酶 氫氧化鉀溶液 三氯乙酸 甲基叔丁基醚-環己烷
離心管 培養箱 超聲水浴 硅烷化梨形瓶 色譜柱

步驟

1.  樣品提取
 
取充分均質的組織樣品10 g于100 mL玻璃離心管中，加入20 mL 0.1 mol/L乙酸緩沖溶液，20 mg葡萄糖醛酸酶和蛋白酶，于均質器上均質1 min，置于培養箱中60培養1 min。冷卻后加入15 mL 200 g/L三氯乙酸（采用廣范圍試紙，調pH1.5），在超聲水浴上超聲10 min。將提取液于10/15 ℃，4000 g離心15 min，若仍然存在懸浮物，溫度可降低至8 ℃。傾出上清液，用20%氫氧化鉀溶液調整pH至5.8～6.2，若在中和過程中出現沉淀，應進行過濾或再次離心。用200 g/L三氯乙酸淋洗電極，并入溶液中，并使總體積接近500 mL。移取20 mL 上述溶液于ISOLUTE HM-N柱中，平衡20 min。制備兩份20 mL溶液，每份加入30 mL甲基叔丁基醚-環己烷（8 + 2），于100 mL硅烷化梨形瓶中，減壓250 mbar，50 ℃旋轉蒸發至干。
 
2.  凈化
 
將ISOLUTE-Si汾置于SPE裝置上，預先按順序加4 mL乙酸乙酯，4 mL乙酸乙酯-甲苯（20 + 80），抽干。用2 mL乙酸乙酯-甲苯（20 + 80）溶解殘渣，超聲振蕩，轉移入柱。然后以4 mL乙酸乙酯-甲苯（20 + 80）淋洗，棄去淋洗液。用4 mL乙酸乙酯-甲苯（65 + 35）洗脫并收集氯霉素組分。
 
2.  衍生化
 
收集溶液于40 ℃在緩慢氮氣流下吹干。用200 uL乙酸乙酯轉移入反應小瓶，加入20 uL內標溶液m-CAP，再次于40 ℃在緩慢氮氣流下吹干。加入50 uL BSTFA-TMCS（99 + 1）溶液，用內襯聚四氟乙烯（PTFE）的螺旋蓋蓋緊，于60 ℃反應l h。冷卻后，在氮氣流下緩慢吹干。加入25uL異辛烷溶解殘渣。供GC-MS測定。
 
3.  儀器條件
 
色譜柱：5%苯基、95%甲基硅氧烷，30 m×0.25 mm×0.25um；
 
柱溫：程序升溫，60 ℃（l min），以40 ℃/min，升至 l80 ℃ ，以8 ℃/min， 升至280 ℃，以5 ℃/min，升至300 ℃；
 
進樣方式：脈沖，無分流；
 
進樣器溫度: 270 ℃ ；
 
載氣：氦氣；
 
接口溫度：300 ℃；
 
離子源溫度：l85 ℃； 
 
NCI離子化模式； 
 
反應氣：甲烷，壓力為533 Pa（4000mTorr）；
 
碰撞氣：氬氣，壓力為0.27 Pa（2mTorr）；
 
電子能量: 200 eV；
 
碰撞電流: 200 mA； 
 
CAP：m/z 466（70）、468（70）、376（30）、378（30）；
 
內標：m/z 47l（70）。