Tau 蛋白硫磺素T檢測操作步驟
材料與儀器
材料:硫黃素 T、PBS、蒸餾水、肝素、0.2μm 注射器過濾器、96 多孔孔板
儀器:移液器、全波長熒光型酶標儀、震蕩孵育器
步驟
1.在蒸餾水中制備 1mM 的硫黃素 T 儲備液 (需是新鮮制備并用 2μm 注射式過濾器過濾)。
2.然后用 PBS pH7.4 將每個孔中的硫黃素 T 儲備液稀釋至最終濃度為 25μM (每孔容量 = 100μL)。
3.向每個孔中加入 10uM 肝素。
4.將分裝小份的 tau 蛋白在使用前于 37℃ 下進行解凍。
5.將原纖維或單體 (或兩者都有) 加入到合適的實驗孔中. 用移液器上下吸放混合孔中物質。
6.將孔板密封并放置于震蕩孵育器上(800rpm),溫度為 37℃。
7.用全波長熒光型酶標儀讀取熒光讀數。
8.再次將孔板密封放置于震蕩孵育器上, 溫度為 37°C。
9.在 1 到 72 小時之間的固定間隔讀數。
注意事項
酶標儀參數設置:
溫度: 37°C
讀取形式: 孔板掃描
波長: 激發光 450nm,發射光 485nm
PMT 增益: 自動
閃光每讀: 6
震蕩: 讀數前 20 秒