培養細胞標記和裂解物的制備實驗-SDS煮沸法
材料與儀器
培養細胞
SDS裂解液 RIPA校正液 免疫沉淀洗液
離心機 培養箱 玻璃培養管
步驟
1. 標記和洗滌細胞（溫和去污裂解法，步驟1~7）。
2a. 對于貼壁細胞：加入適量SDS裂解液至培養皿中。（35 mm 培養皿加0.1 ml，50 mm 培養皿0.25 ml，100 ml 培養皿0.5 ml）立即用橡皮細胞刮于刮下細胞并轉移至帶螺口蓋的微量離心管中。
2b. 對于非貼壁細胞：在旋渦混合器上短暫振蕩細胞沉淀使之松散，加入1 ml SDS裂解緩沖液（毎5×107細胞）后，再次振蕩。
3. 煮沸2~5 min，加入4體積的RIPA正液，充分混勻。
4. 于4℃以26 000 g 離心90 min 或在冷凍離心機上以最大速度離心以回收細胞裂解物。
5. 如常進行免疫沉淀分析，并用免疫沉淀洗液進行洗滌。
