目的基因在真核系統中的表達及細胞內的定位實驗-磷酸鈣法瞬時轉染法
原理
將氯化鈣，DNA和磷酸緩沖液混合，形成包含DNA且極小的不溶的磷酸鈣顆粒（沉淀）。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過胞飲進入目的細胞的細胞質。
材料與儀器
真核細胞
HBS CaCl2 TE 質粒DNA
CO2培養箱
步驟
1. 轉染的前一天在35 mm培養皿中植入細胞（約1×106個細胞），使得第二天轉染時細胞匯合率達到50-80%；
2. 轉染前1-4小時，換成不含血清和雙抗的培養基；
3. 在1. 5 ml無菌的離心管中混合下列藥品：
15. 5 μl 2 MCaCl2，最多10 μg質粒DNA，補加TE(pH8. 0)至125 μl；
4. 在無菌的35 mm平皿中加入125 μl 2×HBS(pH7.10)，然后逐滴加入上述混合物，一邊加一邊充分混合，使磷酸鈣沉淀均勻，室溫放置20分鐘，這時溶液將有非常小的磷酸鈣沉淀顆粒形成；
5. 20分鐘后，將混合物加入細胞中，37 ℃培養箱中培養4-8小時；
6. 4-8小時后，用含血清的完全培養基替換舊培養基，37 ℃培養箱中繼續培養；
7. 在轉染后24-72小時將細胞置于熒光顯微鏡下觀察目的蛋白的表達。
注意事項
1. 所有操作都必須在無菌條件下進行；
2. 2× HBS 、2 M CaCl2和TE須經0.22 μm濾器濾菌分裝后使用；
3. 沉淀的大小和質量對于磷酸鈣轉染的成功至關重要。在實驗中使用的每種試劑都必須小心校準，保證質量，因為甚至偏離最優條件十分之一個pH都會導致磷酸鈣轉染的失敗。
