核酸探針的非放射性標記技術
1．光敏生物素標記核酸
目前使用的光標生物素試劑有兩種：光生物素（乙酸鹽）和補骨脂素生物素。它們都是由一個光敏基團、一個連接臂和一個生物素基團組成。光生物素的光敏基團是-N3，它在光作用下可與核酸中的堿基結合。
補骨脂素生物素中的光敏基團補骨脂素在光照（320～400μm）下，可與單鏈或雙鏈核酸發生反應，反應主要在T上，C上也有一定程度的反應。
光敏生物素的連接臂含6～12個碳原子，用以減少探針雜交時的空間位阻。光敏生物素標記核酸，方法簡單，靈敏度也可達到pg水平，可用于外源基因的檢測。最近出現了一種新的光敏活性DNA生物素試劑，即生物素-聚乙二醇-當歸素（BPA）。
BPA的DNA結合部分是一個活性糖香豆素衍生物，在長波UV下它可與DNA堿基共價鍵結合。BPA反應物與DNA結合比光敏生物素更特異，在可見光下它不與核酸反應，這個特性可使BPA只標記粗制細胞裂解物中的核酸，而不標記蛋白、多糖和其他細胞大分子。
2．酶促生物素標記核酸
以生物素化的脫氧核苷三磷酸（Bio-11-dUTP,Bio –7 – dATP、Bio-11-dCTP）等代替相應32P標記的脫氧核苷三磷酸，經DNA聚合酶作用摻入DNA。
Bio-dUTP代替dTTP,Bio-dATP代替dATP，Bio- dCTP代替dCTP。Bio –11-dUTP的11是指生物素基團與脫氧核苷酸之間連接臂的碳鏈長度。常用的酶促生物素標記DNA的方法有缺口平移法和隨機引物延伸法。
3．寡核苷酸的生物素末端標記
有5’-磷酸的化學標記法和3’-OH的酶促標記法。前者將寡核苷酸的5’-磷酸接上一個乙二胺，然后用琥珀酰亞胺生物素，將生物素基團連接在磷酸酰胺基上。后者是用末端轉移將Bio-11–dUTP加于其3’-OH端（脫去一個焦磷酸）。
4．酶標DNA
標記試劑是辣根過氧化酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）。通過對苯醌（PBQ）與聚乙烯亞胺（PEI）連接而成（HRP-PBQ-PEI ），此試劑在戊二醛的作用下與變性的DNA結合，使HRP與DNA連接在一起，組成HRP標記的DNA探針。
5．酶標寡核苷酸
包括核苷酸5’末端標記HRP法和內部標記AP法。前者是在HRP中產生一個-HS反應基團，在寡核苷酸合成終了加在5’端，帶一個C6的-HS基，與活化的HRP反應生成5’-HRP寡核苷酸。
后者是在全成寡核苷酸過程中將一個5’帶連接臂及CF3基團的尿苷3’亞磷酰亞胺合成在寡核苷酸鏈中，合成后此活化的寡核苷酸與AP反應即得到AP標記的寡核苷酸。
6．DNA半抗原標記
其原理與Bio-11-dTUP相同，只是用毛地黃甙代替生物素形成Dig –11- dUTP，酶促摻入DNA分子。用抗毛地黃甙抗體檢測標記在DNA上的半抗原分子Digoxigenin（地高辛）
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