唾液淀粉酶活性的觀察
(一)原理
酶是指化學(xué)本質(zhì)為蛋白質(zhì)的生物催化劑。在一定條件下,酶促化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行的能力即稱為酶活性(酶活力)。影響酶活性的因素是多方面的,如溫度、PH及某些化學(xué)物質(zhì)等都會影響酶的催化活性。在一定條件下,能使酶活性達(dá)到最高時的溫度即酶的最適溫度,而能使酶活性達(dá)到最高時的PH即酶的最適PH。例如,唾液淀粉酶的最適溫度是37℃,而其最適PH是6.8。能增高酶活性的物質(zhì)稱為酶的激活劑,能降低酶活性卻又不使酶變性的物質(zhì)叫酶的抑制劑。凡能使蛋白質(zhì)變性的因素都可以使酶變性而喪失活性。
酶活性通常是通過測定酶促化學(xué)反應(yīng)的底物或產(chǎn)物量的變化來進(jìn)行觀察的。
本實驗用唾液淀粉酶為材料來觀察酶活性受理化因素影響的情況。唾液中含有唾液淀粉酶。淀粉在該酶的催化作用下會隨著時間的延長而出現(xiàn)不同程度的水解,從而得到各種糊精乃至麥芽糖、少量葡萄糖等水解產(chǎn)物。而碘液能指示淀粉的水解程度——淀粉遇碘可呈紫色、暗褐色與紅色,而麥芽糖與葡萄糖遇碘則不呈顏色反應(yīng),如圖所示:
(二)試劑及器材:
(1)0.5%(W/V)淀粉溶液:稱取0.5g可溶性淀粉,加少量預(yù)冷的蒸餾水,在研缽中調(diào)成糊狀,再徐徐倒入約90ml沸水,同時不斷攪拌,最后加水定容為100ml即成。要求新鮮配制。
(2)稀碘溶液:稱取1.2g I2、2g KI,加少量蒸餾水溶解后,再加蒸餾水至200ml。保存于棕色瓶中,用前5倍稀釋。
(3)不同PH溶液:
A液—0.2mol/L Na2HPO4溶液:稱取35.62g Na2HPO4·12H2O,將之溶于蒸餾水后定容至1000ml。
B—0.1mol/L檸檬酸溶液:稱取19.212g無水檸檬酸,將之溶于蒸餾水后定容至1000ml。
①PH5.0緩沖液——取A液10.3ml、B液9.7ml混合而成。
②PH6.8緩沖液——取A液14.55ml、B液5.45ml混合而成。
③PH8.0緩沖液——取A液19.45ml、B液0.55ml混合而成。
(4)0.5%(w/v)蔗糖溶液:稱取蔗糖0.5g,將之溶于蒸餾水后定容至100ml。
(5)斑氏試劑:
A液—稱取無水CuSO417.4g,將之溶于100ml預(yù)熱的蒸餾水中,冷卻后用蒸餾水稀釋至150ml。
B液—稱取檸檬酸鈉173g、Na2CO3100g,再加蒸餾水600ml,加熱溶解后冷卻,用蒸餾水稀釋至850ml。
將A液與B液混合即得斑氏試劑。
(6)1%(w/v)NaCl溶液:稱取NaCl 1g,將之溶解后用蒸餾水稀釋至100ml。
(7)1%(w/v)CuSO4溶液:稱取無水CuSO4 1g,將之溶解后用蒸餾水稀釋至100ml。
(8)白瓷板(或比色板)、恒溫水浴鍋、電爐
(三)操作
唾液淀粉酶應(yīng)用液的制備
(1)每人取一個干凈的飲水杯,裝上蒸餾水。
(2)先用蒸餾水漱口,將口腔內(nèi)的食物殘渣清除干凈。
(3)口含約20ml蒸餾水,做咀嚼動作1~2min,以分泌較多的唾液。然后將口腔中的唾液吐入一個干凈的小燒杯中
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