過氧化氫含量的測定
簡介
很多生物和非生物逆境都會誘導過氧化氫 (H2O2) 的產生，日。2 作為信號分子 在植物抗逆過程中起重要作用。因此，對 h2o2 在植物體內變化的了解，可反映出植物體對 逆境脅迫的響應程度。通過本實驗可了解 h2o2 含量測定的原理和方法。
原理
過氧化氫含量的測定的基本原理是H2O2與硫酸鈦 (或氯化鈦) 生成過氧化物-鈦復合物黃色沉淀，可被 H2SO4 溶解后，在 415 nm 波長下比色測定。在一定范圍內，其顏色深淺與 H2O2 濃度呈線性關系。
材料與儀器
材料：分別取幼嫩和衰老的植物葉片或其他受逆境脅迫的植物組織。
器材：研缽,0.2 mL 移液管 2 支，5 mL 移液管 1 支，10 mL 容量瓶 7 個,5 mL 離心管 8 支，離心機, 分光光度計。
試劑：
①100 μmol?H2O2 溶液：取 30% 分析純 H2O2 57 μL, 溶于 100 mL, 再稀釋 100 倍
②2 mol ? L-l 硫酸溶液
③5%(W/V) 硫酸鈦溶液
④丙酮
⑤濃氨水
步驟
過氧化氫含量的測定的基本過程可分為如下幾步：
1. 標準曲線的制作：取 10 mL 離心管 7 支，順序編號, 并按表 47-1 加入試劑。
表 47-1 瑋。2 濃度標準曲線制作加樣表 mL
| 試劑 | 離心管號 | ||||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | |
| 100 〃mol ? L_1 H2O2 溶液 | 0 | 0.1 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
| 4°C 下預冷丙酮 | 1.0 | 0.9 | 0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.2 | 0 |
| 5% 硫酸鈦溶液 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
| 濃氨水 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| 3 000 rmin-1 離心 10 min, 棄去上清液，留沉淀 | |||||||
| 2 mol - Li 硫酸溶液 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 |
待沉淀完全溶解后，將其小心轉入 10 mL 容量瓶中，并用蒸餡水少量多次沖洗離心管，將 洗滌液合并后定容至 10 mL 刻度，在 415 nm 波長下比色。
2. 樣品提取和測定：
（1） 稱取新鮮植物組織 2?5 g（視 H2O2 含量多少而定），按材料與提取劑 1 ： 1 的比例加 入 4°C 下預冷的丙酮和少許石英砂研磨成勻漿后，轉入離心管 3 000 r ? min-1 下離心 10 min, 棄去殘渣，上清液即為樣品提取液。
（2） 用移液管吸取樣品提取液 1 mL, 按表 47-1 加入 5% 硫酸鈦和濃氨水，待沉淀形成后 3 000 r ? min"1 離心 10 min, 棄去上清液。沉淀用丙酮反復洗滌 3?5 次，直到去除植物 色素。
（3） 向洗滌后的沉淀中加入 2 mol - L'1 硫酸溶液 5 mL, 待完全溶解后，與標準曲線同樣 的方法定容并比色。
3 . 結果計算：
植物組織中 H2O2 含量（卩 mol?g7FW）=^￡3
式中：〃一標準曲線上查得樣品中 H,O2 的物質的量，卩 mol；
K-樣品提取液總體積，mL；
V1 —測定時用樣品提取液體積，mL；
W 一植物組織鮮重?g。
注意事項
H2O2 溶液在放置過程中會自行分解，因此久置的H2O2溶液臨用前要經過重新標定。
