神經組織細胞培養實驗

原理

神經組織主要由兩種神經細胞（神經元）和神經膠質細胞組成。神經元為高度分化的細胞，在組織發生晚期已失掉增殖能力，對生存條件要求高，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或在加入神經生長因子（NGF）和膠質細胞因子時，才能生存，并可能出現一定程度的分化現象，如長出突起等，但卻難使之增殖；即使培養胚胎組織情況也是如此。對神經細胞的培養待深入研究。

神經膠質細胞為最易培養成分，它分少突、星形和小膠質三種。神經膠質細胞與神經元有共存關系。少突產生豐富的髓磷質，助于神經元興奮傳導，成熟的少突細胞無增殖能力。星形細胞有多種功能，能調節神經元興奮時產生的離子，提供神經元營養，并能產生促神經元發展和完成功能活動的細胞因子，在培養中有增殖能力。以上說明神經膠質細胞對神經元的存在和功能活動是十分重要的；也提示闡明神經膠質的功能活動有利于神經元的培養。

材料與儀器

腦組織
Hanks 胰蛋白酶 血清
紗布 培養瓶 CO2溫箱

步驟

人腦組織可用于神經膠質細胞培養，培養組織來自手術室無菌取腦髓灰質和或白質均可用于培養。

一、程序

1.  獲取腦組織后，先仔細剝除腦膜和血管等纖維成分，置入Hanks液中漂洗1~2 次后，置于30~50 倍的Hanks液中；腦組織比較柔軟，反復吹打即可制備成細胞懸液；

2.  為排除脂肪成分和其它碎塊，把懸液注入離心管中，在室溫直立5~10 分鐘后，細胞或細胞團塊自然下沉，脂肪等雜物易漂浮于懸液表層，吸除上清，如此反復二三次可獲較多的細胞成分；

3.  向末次沉降物中加入適量營養液，通過紗網或紗布濾過，計數細胞并調整好細胞密度，接種入培養瓶或皿中，置5 %CO2溫箱中培養；

4.  細胞生長匯合后，可用0.25 %胰蛋白酶消化法做傳代處理，加消化液的量以能覆蓋細胞層即可，待細胞開始從瓶壁脫落（平均5~10 分鐘），加入含血清培養液，吹打制成細胞懸液（以無細胞團塊的單細胞懸液為佳）。

二、生長特點

1.  接種后初期，細胞可能出現飄浮不貼壁現象，貼壁過程較慢。

2.  貼壁后在短期內也可能不見細胞分裂現象；細胞適應環境過程較長，然而一旦生長后，即能進入較旺盛的增殖狀態。

3.  生長開始常雜有巨噬細胞、成纖維細胞和上皮細胞等，傳二、三代后，這些成分即消失，逐漸形成均一的星形膠質細胞，一般形成連接不甚緊密的單層細胞。

常見問題

一、初代培養

適用于研究神經元的功能活動和膠質細胞的關系等，在不傳代時可培養3~6 個月。神經元能發生一定分化現象，如生長突起，但因無增殖能力，最后衰退死亡；但神經膠質尤以星形細胞能繼續生存和分列增殖。

二、傳代培養

神經膠質細胞是神經組織中比較容易培養的成分。不僅能獲得生長的膠質細胞并可形成能傳代的二倍體細胞系。膠質細胞在培養中生長穩定，不易自發轉化，但對外界因素仍保持很好的敏感性，能用Rous病毒和SV-40等誘發轉化。