球體細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

原理

大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞都具有貼附在底物上生長成單層細(xì)胞的性質(zhì)，如細(xì)胞長成片之后，讓細(xì)胞片與底物脫離，更換到使細(xì)胞不易貼附的底物上繼續(xù)生長時(shí)，則細(xì)胞片能卷聚成球體形，成為球體培養(yǎng)。

材料與儀器

細(xì)胞
Hanks 培養(yǎng)液 胰蛋白酶
吸管

步驟

1.  瓊脂鋪底的培養(yǎng)瓶

30 ml無菌培養(yǎng)瓶，每瓶中加5 ml 2 %瓊脂培養(yǎng)基，冷卻，形成平坦底層后備用；

2.  取生長狀態(tài)良好已聯(lián)接成片的細(xì)胞，用彎頭吸管伸入瓶內(nèi)，把細(xì)胞層縱橫割劃成若干小區(qū)后，倒出培養(yǎng)液；

3.  加入0.25 %的胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下邊消化邊觀察，當(dāng)細(xì)胞小區(qū)邊緣微卷起后便立即終止消化，倒出消化液，用Hanks輕輕漂洗一次（不洗亦可），加入新培養(yǎng)液3~5 ml，用吸管把已松動的細(xì)胞片吸打下來；分裝入1~3 個(gè)含2 %瓊脂培養(yǎng)基底層的培養(yǎng)瓶中，置溫箱繼續(xù)培養(yǎng)，數(shù)日后便可生長成細(xì)胞球體；

4.  換液
培養(yǎng)1~2 日后，如需換液，微傾斜培養(yǎng)瓶，令培養(yǎng)液集于培養(yǎng)瓶底角，停片刻，待球體細(xì)胞下沉后，吸除部分培養(yǎng)液，再補(bǔ)充新培養(yǎng)液。

注意事項(xiàng)

1.  消化細(xì)胞方法是影響細(xì)胞能否集聚成團(tuán)，形成球的一個(gè)重要因素，如用0.25 %的胰蛋白酶加0.2 %的EDTA消化細(xì)胞，雖能把細(xì)胞消化成分散的細(xì)胞懸液，但接種在任何底物上都不易形成球體，可能與EDTA 作用有關(guān)。

2.  當(dāng)細(xì)胞尚未連接成片時(shí)，消化后也容易形成分散的細(xì)胞懸液，同樣難以形成球體；從而細(xì)胞片是形成球體生長的一個(gè)重要條件。

常見問題

球體細(xì)胞也可和單層細(xì)胞混合培養(yǎng)，便于研究兩種不同細(xì)胞的相互影響。方法是

1.  先做單層培養(yǎng)，待細(xì)胞長成單層細(xì)胞后，把2 %瓊脂培養(yǎng)液注入瓶內(nèi)，令其在單層細(xì)胞上面形成瓊脂層。注意在加瓊脂時(shí)，要使瓊脂冷卻到快要凝固前再注入瓶內(nèi)，以避免過熱損傷細(xì)胞。

2.  當(dāng)瓊脂脂固后，再把已準(zhǔn)備好的另一種細(xì)胞球體培養(yǎng)液接種在上面，便形成瓊脂層下為單層細(xì)胞，上層為球體細(xì)胞的混合培養(yǎng)。下層細(xì)胞生活在瓊脂培養(yǎng)液中，既能從瓊脂培養(yǎng)液中也能從上層培養(yǎng)液中獲取營養(yǎng)；因瓊脂的限制卻不易與上層球體細(xì)胞相混或干擾，但相互卻能發(fā)生影響，可借以研究細(xì)胞相互關(guān)系。