放線菌形態觀察實驗-玻璃紙法
原理
玻璃紙是一種透明的半透膜,將滅菌的玻璃紙覆蓋在瓊脂平板表面。然后將放線菌接種于玻璃紙上,經培養,放線菌在玻璃紙上生長形成菌苔。觀察時,揭下玻璃紙,固定在載玻片上直接鏡檢。這種方法既能保持放線菌的自然生長狀態,也便于觀察不同生長期的形態特征。
材料與儀器
細黃鏈霉菌/青色鏈霉菌/弗氏鏈霉菌
滅菌的高氏1號瓊脂 平皿 玻璃紙 蓋玻片 玻璃涂棒(選用) 接種環 載玻片 鑷子 顯微鏡
步驟
1. 倒平板
取融化并冷至大約 50℃ 的高氏 1 號瓊脂約 20 ml 倒平板,凝固待用。
2. 鋪玻璃紙
以無菌操作用鑷子將已滅菌(155~160℃ 干熱滅菌 2 h)的玻璃紙片(似蓋玻片大小)鋪在培養基瓊脂表面。用無菌玻璃涂棒(或接種環)將玻璃紙壓平,使其緊貼在瓊脂表面玻璃紙和瓊脂之間不留氣泡。每個平板可鋪 5~10 塊玻璃紙。也可用略小于平皿的大張玻璃紙代替小紙片書但觀察時需要再剪成小塊。
3. 接種
用接種環挑取菌種斜面培養物(孢子)在玻璃紙上劃線接種。
4. 培養
將平板倒置, 28℃ 培養 3~5d。
5. 鏡檢
在潔凈載玻片上加一小滴水,用鑷子小心取下玻璃紙片。菌面朝上放在玻片的水滴上,使玻璃紙平貼在玻片上(中間勿留氣泡)令先用低倍鏡觀察,找到適當視野后換高倍鏡觀察。
注意事項
操作過程,勿碰動玻璃紙菌面上的培養物。