薄層層析
и3Ma?JIOB 和IIIpa?бep 在1938 年敘述了植物 萃取 物在氧化鋁薄層上 的分離,但是直到1956 年以后薄層層析才逐漸引起各方面的注意和重視。 薄層層析法是將支持物在玻璃板上均勻地鋪成薄層,把待分析的混合物 加到薄層上,然后選擇合適的溶劑進行展開,而達到分離鑒定的目的。
薄層 層析兼有柱層析和紙層析的優點。它操作方便,設備簡單,展開時間短,一 般只需幾分鐘到幾十分鐘。它靈敏度高,適用于微量樣品的分析(小到 0.01mg),但是加大薄層的厚度則又能分離較多(大到500mg)的樣品。
薄 層層析還有一個優點是除了可用一般顯色劑外,對某些薄層材料還可用腐蝕 性顯色劑,另外,還可以在支持物中加 熒光染料 以有助于點的鑒別。
薄層層析法分離物質的原理依所用不同支持物的性質而不同,可以是吸 附層析、離子交換層析、分配層析或是凝膠過濾。
1、薄層的制作在玻璃板上涂鋪一層薄層,最簡單的方法是在一根玻 棒的兩端繞幾圈膠布,用玻棒壓在玻板上,把支持物向一個方向推動,即成薄層。
有時用上述方法制得薄層不太均勻,可能用有機玻璃自制一個涂鋪器即 能取得滿意的結果。
薄層厚度小于200um 時將影響Rf 值,一般情況下厚度為250um 比較合 適。
可做薄層材料的物質很多,如硅膠、氧化鋁、纖維素粉、DEAE 纖維素、 葡聚糖等,具體選擇哪一種依所研究的問題而定。硅膠對大多數的物質分離 都是適宜的。
有時在硅膠中加入煅石膏作為粘合劑,這時一旦與水調合就需快速操作。
2、展開薄層層析的加樣與紙層析基本相同。薄層的展開需在密閉的 器皿中進行,溶劑必須達到飽和,可以在器皿內部貼上浸濕了溶劑的 濾紙 條。薄層層析的展開方式與紙層析一樣,可以是上行、下行、單向或雙向。
3、定位和紙層析一樣,可用適當的顯色劑噴霧或根據組分的紫外線 吸收或熒光來定位。在有放射性物質時用掃描來定位。
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