載體對溶解性和表達的影響
DNA序列的某些部分，如Shine-Dalgaro盒、啟動子、調(diào)控序列、轉(zhuǎn)錄終止子、復制源等，控制所需基因的翻譯和轉(zhuǎn)錄。此外，選擇元件被整合到表達載體中以促進質(zhì)粒在靶細胞中的選擇。包含融合標簽是大腸桿菌表達載體的另一個基本部分。當選擇啟動子框架時，應(yīng)該考慮下游應(yīng)用和蛋白質(zhì)靶類型。當處理潛在有害的蛋白質(zhì)時，選擇基礎(chǔ)輸出水平較低的啟動子系統(tǒng)是明智的。另一方面，為了盡可能提高蛋白質(zhì)產(chǎn)量，必須選擇更有效的啟動子。對于易于聚集的蛋白質(zhì)，可以考慮的一個選擇是使用冷休克啟動子，允許在較低的溫度下表達。來自細菌和其他更大的生物的蛋白質(zhì)通常折疊更長時間并粘在一起。在大腸桿菌中，折催化劑和蛋白質(zhì)伴侶可以用來防止蛋白質(zhì)粘在一起，同時使折尋更容易，兩種蛋白質(zhì)，一種在靶質(zhì)粒上編碼，另一種在獨立的質(zhì)粒上編碼，可以共表達。融合標簽在基因水平上附著在特定的蛋白質(zhì)上，使它們更易溶解或更容易被發(fā)現(xiàn)和純化。你通常必須嘗試幾種不同的標簽才能知道哪種融合標簽能產(chǎn)生最易溶解的蛋白質(zhì)。此外，標簽的定位至關(guān)重要，它可以位于感興趣的蛋白質(zhì)的C-未端或N-未端。大多數(shù)融合涉及N-未端，這種融合有一個優(yōu)勢:與C-未端的對應(yīng)蛋白相比，它通常提高了可溶性蛋白的表達?？紤]到融合標簽的可用性可能阻礙重組合成蛋白的生物學功能，在融合蛋白純化后酶促消除標簽可能是有用的。為了便于標簽的去除，建議整合一個對給定序列*特的蛋白酶的分割部分。
