細菌表達系統
說到生產重組蛋白,大腸桿菌是常見的來源之一。雖然大部分重組蛋白是在大腸桿菌的細胞質中產生的,但二硫鍵結合的重組蛋白經常是在周質中合成的。
氧化棲息地和駐留二硫鍵形成(Dsb)-系統可以通過將這些蛋白質導向周質來增強適當的二硫鍵,將周質用于具有二硫鍵的重組蛋白更好,但是穿過細胞質屏障的靶向問題會顯著降低周質產量,。讓我們看看涉及的因素和條件蛋白質表達優化在細菌蛋白質系統中,蛋白質序列和基因對可溶性和表達的影響
導致異源蛋白質不表達的一個普遍因素是在感興趣的mRNA中存在"奇怪的"密碼子。有可能通過密碼子增強的基因生產來避免這種密碼子異常。基因合成的一個好處是,它讓你改變基因的密碼子偏好,以便更好地與雜交宿主合作。用不常見的tRNAs加強的表達批次可以克服大腸桿菌重組基因中固有的密碼子異常。表達產量和溶解度都受到靶結構域起始和未端殘基的影響,通過分析蛋白質的結構和功能,我們可以找到構建蛋白質結構域的最佳位置,通過將感興趣的蛋白質序列與同源蛋白質結構相匹配,有可能確定結構域結構未知的蛋白質的合適結構域邊界,如果你沒有獲得同源蛋白質復合物的途徑,你應該使用二級解剖部分的預測。