臺盼藍(lán)（trypan blue）排斥實(shí)驗(yàn)
臺盼藍(lán)（trypan blue）排斥實(shí)驗(yàn)
一、目的學(xué)習(xí)臺盼藍(lán)排斥實(shí)驗(yàn)的原理和方法
二、概述臺盼藍(lán)又稱錐藍(lán)，是一種陰離子型染料，這種染料不能透過活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不著色，但死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增加，可使染料通過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使死細(xì)胞著色呈藍(lán)色。是最常用的檢測細(xì)胞活率的方法。細(xì)胞活力常用百分比表示，活力的大小對試驗(yàn)結(jié)果有很大影響。細(xì)胞活力的測定有許多方法，最簡便常用的方法是臺盼藍(lán)（trypan blue）染色法。
三、材料
1. 顯微鏡、玻片、蓋玻片、滴管
2. 試劑：0.4%臺盼藍(lán)染液：1) 臺盼藍(lán)（Trypan blue） 0.4g 2) 生理鹽水 100ml
四、操作步驟
1、將待染色細(xì)胞稀釋至所需濃度。（方法及濃度范圍與細(xì)胞計(jì)數(shù)相同）
2、每0.1ml細(xì)胞懸夜約加新鮮配置的染液一小滴，室溫下染3～5min 。
3、染色過的細(xì)胞材料，取一滴細(xì)胞懸液置玻片上，加蓋玻片后放在高倍鏡下觀察。
4、死亡的細(xì)胞著淺藍(lán)色并膨大，無光澤；活細(xì)胞不著色并保持正常形態(tài)，有光澤。計(jì)數(shù)100～200個(gè)白細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)未染色細(xì)胞。可按公式計(jì)算出細(xì)胞活力。 細(xì)胞活力（%）=未染色的細(xì)胞數(shù)/觀察的細(xì)胞總數(shù) × 100五、注意事項(xiàng)1. 染色時(shí)間不能太長，否則活細(xì)胞也會逐漸積累染料而染成顏色，使檢測結(jié)果偏低。2. 另可結(jié)合細(xì)胞計(jì)數(shù)方法，同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力檢測。
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