生物化學實驗的基本操作
一、玻璃 儀器 的使用及清潔
(一)玻璃 儀器 的洗滌及干燥
1、一般儀器:燒杯、試管、離心管等普通玻璃儀器,可直接用毛刷蘸餐洗凈刷洗,然后用自來水沖洗,直至容器內不掛水珠即可。最后用少量蒸餾水沖洗內壁2-3次,倒置晾干即可。
2、容量分析儀器:容量瓶、滴定管及吸管等容量儀器,用后用自來水多次沖洗,如能清潔(壁不掛水珠),再用蒸餾水少量沖洗2~3次晾干即可備用。若仍不干凈附有油污等,則須于干后放入鉻酸洗液內浸泡數小時,然后倒凈(或撈出)洗液,用自來水充分沖洗至水不顯黃色后再沖幾次,最后用少量蒸餾水沖洗2~3次晾干備用。
在做酶學實驗時,對儀器的清潔要求更高,因如有極微量的污物(如重金屬離子)即可導致整個實驗失敗。因此,必要時儀器經上述方法洗滌后,還需用稀鹽酸或稀硝酸洗滌,以除去鉻及其它金屬離子,然后再用自來水、蒸餾水沖洗。生化實驗室常用的洗液有以下幾種:
(1)鉻酸洗液:為最常用的洗液,由重鉻酸鉀、粗硫酸及水配制而成,去污力強,清洗效果好。其配制方法有多種,可根據需要進行選擇,常用的配方如下表。
重鉻酸鉀(g)10060100
水(ml)750300200
粗硫酸(ml)250460800
清潔性能較弱較強(常用)最強
配制方法為:先將重鉻酸鉀溶于水,再慢慢加入濃硫酸。因配制過程產生大量熱,容器需放入冷水中,邊加硫酸邊攪動混合。由于產熱量很大,使用玻璃容器有破裂的危險,所以最好用耐高溫的陶瓷或耐酸的搪瓷容器。洗液可多次反復使用,如效力變弱,可加入少量重鉻酸鉀及濃硫酸繼續使用,但如果變為綠色,則不宜再用。
(2)10%尿素液:為蛋白質良好溶劑,幫適用于洗滌盛血的容器。
(3)草酸鹽液:用于清洗過錳酸鉀的痕跡。
(4)硝酸液:用1:1的硝酸水溶液,用于清洗CO2測定器及微量滴定管。
(5)乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na 2 )液:5~10%的EDTA-Na 2 液可用于洗滌器皿內無機鹽類。
玻璃儀器的干燥方法可根據不同儀器的種類而定。一般地說洗凈后的玻璃儀器,如不急用應倒放在晾架上令其自然干燥。若有急用可放在烘烤箱中烤干,但容量玻璃儀器,如容量瓶、吸量管、滴定管以及燒結、結構復雜的玻璃儀器等,嚴禁烘烤。此類儀器,如急用可采用水泵抽氣法干燥。
(二)常用玻璃儀器的使用
1、吸量管:吸量管是用來測量一定容積的液體,并把它從一個器皿轉移至另一個器皿中的量器。常用的吸量管有以下幾種:
(1)刻度吸量管:刻度吸量管是多刻度吸量管,有0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0毫升等規格。吸量管刻度所標的數字有自上而下和自下而上兩種,使用之前應仔細分辨。實驗室所用之刻度吸管多屬于刻度到尖端的吸管,所以要吹出尖端留存的液體。
(2)奧氏吸管:在量取粘度較大的液體如血液、血清等時,應當使用奧氏吸管。這種吸管也是單標的,并且在其下端有一個膨大部分。所以液體與吸管表面接觸面積較小,當量取血液時,較他種吸管準確。奧氏吸管的容量包括遺留在尖端的液體,故在緩緩使液體流出后,再停留數秒鐘,吹出最后一滴。在學生實驗中常用的有1、2、5毫升等規格。
吸量管使用法:使用吸量管時,用拇指和中指靠近頂端部分。將管的下端插入液體里,用吸球吸入液體至需要刻度的標線上1~2厘米處(插入液面下的部分不可太深,以免管的外壁沾附的溶液太多;也不可太淺,防止空氣突然進入管內,將溶液吸入吸球內),將已充滿液體的吸量管提出液面,用小片濾紙揩去管外沾附的溶液,把吸管提到與眼睛在同一水平線上。然后小心松開上口,按所需要液體容積緩緩自由流出。最后再根據規定吹出或者不吹出尖端的一滴。
(3)微量加樣器
2、容量瓶及量筒:容量瓶是一個細長頸梨形的平底瓶,具有磨口塞,頸上有標線,表示在所示溫度下(一般為20℃)當液體充滿到標線時,液體體積恰好與瓶下所注明的體積相等。容量瓶有10、25、50、100、200、250、500、1000、2000毫升等規格。
容量瓶是裝量型的定量容器,多用作稀釋溶液或配制精確 試劑 。當將液體加至刻度后須用瓶塞塞好,顛倒混勻數次方可使用。
容量瓶是較精確的定量容器,不得直接加熱或烘烤,也不應將盛有溶液的容量瓶放入冰箱內。當配制溶液需要加熱促其溶解時,必須在燒杯中加熱溶解,并待溶液達到室溫后,再定量地轉入容量瓶內,然后稀釋到刻度,并要注意搖勻。
當所量取的液體量要求不十分準確時,可使用量筒,因其較使用吸管或量瓶更為簡便,量筒之底座及筒身是焊接一起的,因而不能 量取過熱液體,更不能直接加熱,以防炸裂。
3、滴定管:滴定管是供容量分析滴定之用,有帶玻塞及橡皮管的兩種類型。前者用以量酸,后者用以量堿。
滴定管有刻度較精細的微量滴定管,有1.0、2.0、5.0、10毫升等規格。還有25、50、100毫升等規格的常量滴定管。使用滴定管應該注意以下事項:
(1)檢查是否清潔干燥,是否漏水,玻塞是否滑潤,如有漏水或轉動不靈,應拆下活塞重新涂抹凡士林。涂抹前要將玻塞擦干,用手指沾少量凡士林在活塞兩頭各擦一薄層,將活塞插入槽內,然后向同一方向轉動活塞,直到從外面看時,全部透明為止。油涂好后,在活塞的小頭的槽上套一橡皮圈,以防活塞滑脫。
(2)使用前必須認出每一格表示多少毫升。先用少量滴定液清洗滴定管2~3次,然后方可裝液。裝液體后,管內如有氣泡必須排出。
(3)滴定前先應讀取起始點。滴定時,左手控制玻塞,右手持瓶,邊滴邊搖,密切注意被滴定溶液的顏色變化。
(4)裝置滴定管時,管身必須與地面垂直。讀數時眼睛與溶液月形面下緣在同一水平線上,不要仰頭或低頭讀數。
(5)如用酸式滴定管裝堿性溶液,滴定后應立即洗凈,以免活塞粘連。
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