對流免疫電泳（counter immunoelectrophoresis，CIEP）
【原理】
對流免疫電泳（counter immunoelectrophoresis，CIEP）是指在適宜緩沖液和電場條件下，抗原 和相應抗體在瓊脂凝膠中，由于電泳和電滲作用抗原，抗原向正極移動，抗體向負極移動。將抗原放負極端，抗體放正極端，則抗原抗體相向移動，在兩孔之間相遇，在比例合適時形成沉淀線。以Sm和RNP（核糖核蛋白）等可提取性抗原（extractable nucleat antigen，ENA）檢測相應抗Sm和RNP為例。
【材料】
1． Sm/RNP抗原制備 將新鮮或凍存于-30℃的小牛胸腺除去脂肪與結(jié)締組織后，用0.004 mol/L 氯化鈣-0.28 mol/L蔗糖溶液洗凈，切碎。每50 g胸腺加上述含鈣0.28 mol/L蔗糖450 ml。于勻漿器中慢檔（約8000 r/min）勻漿2～3 min（速度過高，核可能破壞）。兩層紗布過濾，濾液1500 r/min離心20 min，棄上清液（胞漿成分）。沉淀（核）用0.004 mol/L氯化鈣-0.25 mol/L蔗糖洗1次。用50 ml pH 7.1 0.1 mol/L PBS （或pH 7.2 0.01 mol/L PBS）將沉淀物懸起，于勻漿器中快檔勻漿2～3 min，使核破碎。4℃過夜后用紗布濾除不溶性物質(zhì)，濾液以30000 g 4℃離心1 h除去沉淀物。上清液按10 mg/ml比例加入醋酸鈉干粉，緩慢攪拌至溶。加入6倍體積的無水乙醇，發(fā)生絮片狀沉淀，10 min后1500 r/min離心10 min。棄上清液，沉淀中加入生理鹽水20 ml，使大部分溶解，1500 r/min，棄沉淀。上清液對蒸餾水透析后分裝，冷凍干燥保存。
2． 待檢血清和已知抗ENA陽性血清。
3． PH 8.6 0.05 mol/L巴比妥緩沖液。
4． 瓊脂 、載玻片、吸管、毛細滴管、打孔器、電泳儀、電泳槽、萬用表、適量濾紙或紗布。
【方法】
1． 制備1.2%巴比妥緩沖瓊脂凝膠板 先用生理鹽水50 ml加1.2 g瓊脂隔水煮沸融化，再加50 ml pH8.6 0.05 mol/L巴比妥緩沖液繼續(xù)隔水煮沸至澄清，取融化的瓊脂3.5～4 ml，澆于載玻片上，冷卻后打孔。
2． 打孔 用打孔器（或用繪圖筆尖）成對打孔，孔徑3 mm，孔距6 mm。
3． 打樣 先于陽極側(cè)孔內(nèi)加待檢血清或陽性對照血清，10 V/cm電壓，電泳30 min（時間可隨具體實驗條件加以調(diào)整），再于陰極側(cè)孔內(nèi)加ENA抗原（巴比妥緩沖液溶解的），繼續(xù)電泳約45 min。
4． 待陽性對照血清孔與ENA抗原孔之間出現(xiàn)白色沉淀線時停止電泳。
5． 初步觀察后，將凝膠板置濕盒繼續(xù)擴散24 h。
【結(jié)果】
判定結(jié)果時，待檢血清如含抗RNP與抗Sm兩種抗體則在與ENA抗原孔之間出現(xiàn)兩條沉淀線，靠近陰極側(cè)的沉淀線由抗Sm與相應抗原形成，靠近陽極側(cè)的沉淀線則由抗RNP與相應抗原形成。如只出現(xiàn)一條沉淀線，則須與陽性對照血清參比，以判定其性質(zhì)。由于Sm抗原可耐56℃ 1 h，RNP則遭破壞，故也可將ENA抗原加熱處理后再與待測血清作對流免疫電泳。
對流免疫電泳簡便、快速、敏感度較雙向瓊脂擴散試驗高8～16倍（如測AFP敏感度為2.5～5.0μg/ml），但分辨力低于雙向瓊脂擴散。
注意事項
本方法以高電滲為其特點之一，但電滲作用過強會使多數(shù)蛋白質(zhì)向陰極移動，因此不宜使用電滲作用過強的瓊脂。如果抗原也是免疫球蛋白，或抗原抗體的擴散率比較接近，會導致電泳時抗原和抗體向一個方向移動，不能形成對流效應，這種情況下不宜做對流免疫電泳。
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