核酸的沉降特性
溶液中的核酸分子在引力場(chǎng)中可以下沉。不同構(gòu)象的核酸（線形，開環(huán)，超螺旋結(jié)構(gòu)）、蛋白質(zhì)及其他雜質(zhì)在超離心機(jī)的強(qiáng)大引力場(chǎng)中，沉降的速率有很大差異，所以可以用超離心法純化核酸，或?qū)⒉煌瑯?gòu)象的核酸進(jìn)行分離，也可以測(cè)定核酸的沉降常數(shù)與分子量。
應(yīng)用不同介質(zhì)組成密度梯度進(jìn)行超離心分離核酸時(shí)，效果較好。 RNA 分離常用蔗糖梯度。分離 DNA 時(shí)用得最多的是氯化銫梯度。氯化銫在水中有很大的溶解度。可以制成濃度很高（ 8mol ／ L ）的溶液。
應(yīng)用啡啶溴紅—氯化銫密度梯度平衡超離心，很容易將不同構(gòu)象的 DNA 、 RNA 及蛋白質(zhì)分開。這個(gè)方法是目前實(shí)驗(yàn)室中純化質(zhì)粒 DNA 時(shí)最常用的方法。如果應(yīng)用垂直轉(zhuǎn)頭，當(dāng)轉(zhuǎn)速為 65 000r/min （ Beckman L-70 超離心機(jī)），只要 6h 即可以完成分離工作。但是如果采用角轉(zhuǎn)頭，轉(zhuǎn)速為 45 000r/min 時(shí)，則需 36h 。離心完畢后，離心管中各種成分的分布可以在紫外光照射下顯示得一清二楚 。蛋白質(zhì)漂浮在最上面， RNA 沉淀在底部。超螺旋 DNA 沉降較快，開環(huán)及線形 DNA 沉降較慢。用注射針頭從離心管側(cè)面在超螺旋 DNA 區(qū)帶部位刺入，收集這一區(qū)帶的 DNA 。用異戊醇抽提收集到的 DNA 以除去染料，然后透析除 CsCl ，再用苯酚抽提 1~2 次，即可用乙醇將 DNA 沉淀出來。這樣得到的 DNA 有很高的純度， 可供 DNA 重組、測(cè)定序列及繪制限制酶圖譜等。在少數(shù)情況下，需要特別純的 DNA 時(shí)，可以將此 DNA 樣品再進(jìn)行一次氯化銫密度梯度超離心分離。
北京天優(yōu)福康生物科技有限公司
官網(wǎng)：http://www.dhfpump.com/
服務(wù)熱線：400-860-6160
聯(lián)系電話/微信：13718308763
QQ:2136615612 3317607072
E-mail：Tianyoubzwz@163.com
