熒光原位雜交（FISH）技術
1974年Evans首次將染色體顯帶技術和染色體原位雜交聯合應用，提高了定位的準確性。20世紀70年代后期人們開始探討熒光標記的原位雜交，即FISH技術。1981年Harper成功地將單拷貝的DNA序列定位到G顯帶標本上，標志著染色體定位技術取得了重要進展。20世紀90年代，隨著人類基因組計劃的進行，由于繪制高分辨人類基因組圖譜的需要，FISH技術得到了迅速的發展和廣泛應用。
1．原理
FISH(fluorescence in situ hybridization)技術是一種重要的非放射性原位雜交技術。它的基本原理是:如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補的，二者經變性-退火-復性，即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標記上報告分子如生物素、地高辛，可利用該報告分子與熒光素標記的特異親和素之間的免疫化學反應，經熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進行定性、定量或相對定位分析。
2．實驗流程
FISH樣本的制備→探針的制備→探針標記→雜交→染色體顯帶→熒光顯微鏡檢測→結果分析。
3．特點
原位雜交的探針按標記分子類型分為放射性標記和非放射性標記。用同位素標記的放射性探針優勢在于對制備樣品的要求不高，可以通過延長曝光時間加強信號強度，故較靈敏。缺點是探針不穩定、自顯影時間長、放射線的散射使得空間分辨率不高、及同位素操作較繁瑣等。采用熒光標記系統則可克服這些不足，這就是FISH技術。FISH技術作為非放射性檢測體系，具有以下優點:
1、熒光 試劑 和探針經濟、安全；
2、探針穩定，一次標記后可在兩年內使用；
3、實驗周期短、能迅速得到結果、特異性好、定位準確；
4、FISH可定位長度在1kb的DNA序列，其靈敏度與放射性探針相當；
5、多色FISH通過在同一個核中顯示不同的顏色可同時檢測多種序列；
6、既可以在玻片上顯示中期染色體數量或結構的變化，也可以在懸液中顯示間期染色體DNA的結構。
缺點：不能達到100%雜交，特別是在應用較短的cDNA探針時效率明顯下降。
4．應用
該技術不但可用于已知基因或序列的染色體定位，而且也可用于未克隆基因或遺傳標記及染色體畸變的研究。在基因定性、定量、整合、表達等方面的研究中頗具優勢。
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