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重組質粒的提取
發布日期:2022-10-08 09:59:56


重組質粒的提取


質粒提取過程參照E.Z.N.A Plasmid Extraction Kit進行。


(1) 用無菌牙簽挑取平板上白色單菌落(5~10個)分別接種至3-5ml LB培養液(Amp )中,200rpm培養14~16小時;


(2) 室溫下,10,000?g離心1分鐘收菌;


(3) 加入溶液I 250μl,渦旋重懸菌體;


(4) 加入溶液II 250μl,溫和倒轉4~6次混勻,室溫放置2分鐘


(5) 加入350μl溶液III,溫和倒轉至有白色絮狀沉淀產生, 室溫下,10,000?g離心10分鐘;


(6) 轉移上清液于分離柱中,室溫下,10,000?g離心1分鐘;


(7) 倒棄流出液,加入500μl HB Buffer,室溫下,10,000?g離心1分鐘


(8) 倒棄流出液,加入750μl Wash Buffer,室溫下,10,000?g離心1分鐘,倒棄流出液,重復此步驟一次;


(9) 室溫下,10,000?g離心1分鐘,以去除分離柱中殘余的乙醇


(10) 將分離柱重新放入一個干凈的1.5ml離心管中,加入30~50μl滅菌水,靜置3-5分鐘,定溫下,10,000?g離心1分鐘以洗出質粒DNA,-20℃保存。

 



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