紙層析法（paper chromatography）分離鑒定氨基酸
【實驗原理】
層析分離技術是利用被分離的混合物中各組分物理化學的性質（分子的形狀和大小、分子極性、吸附力、分子親和力、分配系數等）的不同，使各組分以不同程度分布在兩相（流動相和固定相）中，當流動相流過固定相時，各組分以不同的速度移動，從而達到分離。
紙層析法（paper chromatography）是生物化學上分離、鑒定氨基酸混合物的常用技術，可用于蛋白質的氨基酸成分的定性鑒定和定量測定。紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法，其中濾紙纖維素上吸附的水是固定相，展層用的有機溶溶劑是流動相。在層析時，將樣品點在距濾紙一端約2～3cm的某一處，該點稱為原點；然后在密閉容器中層析溶劑沿濾紙的一個方向進行展層，這樣混合氨基酸在兩相中不斷分配，由于分配系數（Kd）不同，結果它們分布在濾紙的不同位置上。物質被分離后在紙層析圖譜上的位置可用比移值（rate of flow, Rf）來表示。所謂Rf，是指在紙層析中，從原點至氨基酸停留點（又稱為層析點）中心的距離（X）與原點至溶劑前沿的距離（Y）的比值：
物質的移動速率以 R f 值表示：
在一定條件下某種物質的Rf值是常數。Rf值的大小與物質的結構、性質、溶劑系統、溫度、濕度、層析濾紙的型號和質量等因素有關。
【器材與 試劑 】
（一）器材
1. 層析缸
2. 點樣毛細管
3. 小燒杯
4. 培養皿
5. 量筒
6. 噴霧器
7. 吹風機（或烘箱）
8. 層析濾紙（新華一號）
9. 直尺及鉛筆
(二) 試劑
1. 擴展劑(水飽和的正丁醇和乙酸混合液)
2. 氨基酸溶液 3. 顯色劑:茚三酮溶液
【實驗步驟】
1.準備濾紙:在紙的一端距邊緣2～3㎝處用鉛筆劃一條直線，間隔2㎝作一記號。
2.點樣：用毛細管將各氨基酸樣品分別點在標記的位置上，點樣時，毛細管口應與濾紙輕輕接觸，樣點直徑一般控制在 0.3cm 之內。用吹風機稍加吹干后再點下一次,重復2～3次。
3.擴展：層析缸中加入30ml擴展劑，將縫成筒狀的濾紙直立其中,采用上行法進行展層。當溶劑前沿上升到距紙上端 1 cm 時，取出濾紙，立即用鉛筆記下溶劑前沿的位置，用吹風機吹干濾紙上的溶劑。用鉛筆描出溶劑前沿界線，吹干。
4.顯色：濾紙表面均勻噴上茚三酮溶液，切勿噴得過多致使斑點擴散。然后將濾紙用熱風吹干或置 烘箱 中（100℃）烘烤5min。
5.結果:用鉛筆輕輕描出顯色斑點的形狀，并用一直尺度量每一顯色斑點中心與原點之間的距離和原點到溶劑前沿的距離，計算各色斑的 R f 值，與標準 氨基酸 的 R f 值對照，確定混合物中含有哪些 氨基酸 。
計算：各種氨基酸的Rf值。
6.結果分析
注意事項 ：
1 .點樣時要避免手指或唾液等污染 濾紙 有效面（即展層時樣品可能達到的部分）。
2 .點樣斑點不能太大（直徑應小于 0 . 3 cm ），防止層析后氨基酸斑點過度擴散
和重疊，且吹風溫度不宜過高，否則斑點變黃。
3. 展層開始時切勿使樣品點浸入溶劑中。
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