CAT的測定方法：高錳酸鉀法
當植物暴露在逆境中或者發生衰老的時候，就會加強體內活性氧的代謝，因而會產生較多的過氧化氫，并且積累下來。 過氧化氫會對植物細胞產生損傷，因為它能夠直接或間接讓核酸、蛋白質等發生氧化現象，也可以破壞細胞膜 的構造，從而加速細胞的衰老和解體。過氧化氫酶可以清除 過氧化氫 ，是植物體內重要的酶促防御系統之一。因此，植物組織中過氧化氫酶活性與植物的抗逆性密切相關。本實驗用高錳酸鉀滴定法測CAT活性。
高錳酸鉀滴定法
一、原理
過氧化氫酶能催化過氧化氫分解為水和分子 氧，可根據 H 2 O 2 的消耗量或 O 2 的生成量測定該酶活力大小。在反應系統中加入一定量(反應過量)的 H 2 O 2 溶液，經酶促反應后，用標準高錳酸鉀溶液(在酸性條件下)滴定多余的 H 2 O 2 ，即可求出消耗的 H 2 O 2 的量。
5H 2 O 2 +2KMnO 4 +4H 2 SO 4 → 5O 2 +2KHSO 4 +8H 2 O+2MnSO 4
二、實驗材料、試劑與儀器設備
(一)實驗材料
植物葉片。
(二)試劑
1 . 10 % H 2 SO 4 。
2 . 0.2 mol/L 磷酸緩沖液 pH7.8 。
3 . 0.1 mol/L 高錳酸鉀標準液：稱取 KMnO 4 ( AR ) 3.1605 g ，用新煮沸冷卻蒸餾水配制成 1000 mL ，用 0.1 mol/L 草酸溶液標定。
4 . 0.1 mol/L H 2 O 2 ： 30 % H 2 O 2 大約等于 17.6 mol/L ，取 30 % H 2 O 2 溶液 5.68 mL ，稀釋至 1000 mL ，用標準 0.1 mol KMn0 4 溶液(在酸性條件下)進行標定。
5 . 0.1 mol/L 草酸：稱取分析純 H 2 C 2 O 4 · 2H 2 O 12.607 g ，用蒸餾水溶解后，定容至 1000 mL 。
(三)儀器設備
研缽， 50 mL 三角瓶 14 個， 10 mL 酸式滴定管，恒溫水浴鍋， 25 mL 容量瓶 1 個。
三、實驗步驟
1 .酶液提取 稱取小麥葉片 2.5 g 加入 pH7.8 的磷酸緩沖溶液少量，研磨成勻漿，轉移至 25 mL 容量瓶中，用該緩沖液沖洗研缽，并將沖洗液轉入容量瓶中，用同一緩沖液定容， 4000 r/min 離心 15 min ，上清液即為過氧化氫酶的粗提液。
2 .取 50 mL 三角瓶 4 個( 2 個測定， 2 個對照)，測定瓶中加入酶液 2.5 mL ，對照瓶中加入煮死酶液 2.5 mL ，再加入 2.5 mL 0.1 mol/L H 2 O 2 ，同時計時，于 30 ℃恒溫水浴中保溫 10 min 后，立即加入 10 % H 2 SO 4 2.5 mL 。
3 .用 0.1 mol/L KMnO 4 標準溶液滴定 H 2 O 2 ，至出現粉紅色(在 30 min 內不消失)為終點。
四、結果計算
酶活性用每克鮮重樣品 l min 內分解 H 2 O 2 的毫克數表示：
酶活 [mg/ ( g ? min ) ] = 式中： A ——對照 KMnO 4 滴定毫升數( mL )。
B ——酶反應后 KMnO 4 滴定毫升數( mL )。
V T ——酶液總量( mL )。
1.7 —— l mL 0.1 mol/L 的 KMnO 4 相當于 1.7 mg H 2 O 2 。
FW ——樣品鮮重( g )。
V 1 ——反應所用酶液量( mL )。
t ——反應時間( min )。
注意事項：所用高錳酸鉀溶液及過氧化氫溶液在每次使用前要重新進行測定。
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