薄層層析和紙層析
一、實驗目的：
1．了解色譜法的基本原理及薄層層析和紙層析的用途
2．學習并掌握薄層層析和紙層析的操作方法
二、實驗原理：
色譜法的基本原理是利用混合物中各組分在某一物質中的吸附或溶解性能的不同?；蚱渌H和作用性能的差異，使混合物的溶液流經該物質，進行反復的吸附或分配等作用，從而將各組分分開。
用途：分離，純化，鑒定有機物的重要方法。
| 溶質的最高濃度中心至原點中心的距離 |
| 溶劑前沿至原點中心的距離 |
三、所用試劑及儀器：
偶氮苯，蘇丹III，偶氮苯和蘇丹三混合物，9:1環己烷：乙酸乙脂，天門冬氨酸 蛋氨酸，茚三酮乙醇溶液；薄層板，毛細管，展開缸，10：50：2的水-乙醇-冰醋酸。
四、操作步驟：
（一）薄層層析：偶氮苯和蘇丹III的分離
薄層板的制備：將3g硅膠G和5%羧甲基纖維素鈉(CMC)水溶液混合調勻呈糊狀，傾倒在潔凈的玻璃片上，制成均勻平整的薄層板。室溫放置0.5h后，防入 烘箱 中110 0 C,0.5h取出備用。
點樣：在距離薄層板一端1.5cm處，用鉛筆輕輕劃一條線起始線，并用毛細管分別點上偶氮苯，混合樣，蘇丹III。
展開：用9：1的環己烷-乙酸乙脂為展開劑，待樣點干燥后，放入展開瓶中展開（注意：展開劑不易過多，使樣點浸入0.5cm為宜）當展開劑到達薄板上端1cm處時，將薄板取出，并用鉛筆劃出溶劑前沿。觀察分離情況計算并比較二者的R f 值。
（二）紙層析：天門冬 氨基酸 和蛋氨酸的分離
在特定展開劑中分配系數的不同，采用標準樣品和試樣在同一張層析紙上進行層析。比較它們的R f 值，以達到分離和鑒定 氨基酸 的目的。
吸取20ml展開劑（10：50：2的水-乙醇-冰醋酸），放入展開缸中，按圖3.38制備層析 濾紙
點樣（同薄層層析）
展開：待樣點干燥后，小心地置于事先盛有展開劑的展開缸中。
顯色：當溶劑前沿到達終點線時，取出紙條并用吹風機吹干，將茚三酮溶液均勻地噴在 濾紙 上，干燥后出現紅斑點。
求R f 值，對照標樣和混合樣品的R f 值，以鑒定混合樣中的氨基酸。
注意事項
制板時要求薄層平滑均勻，無裂縫。
放入展開瓶中的溶劑不易過多
點樣時不要刺破薄板
點樣管切勿弄混
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