97久久国产成人免费网站-色欲色欲久久综合网-韩国精品一区二区三区无码视频-在线看片免费人成视频影院看-国产成人a人亚洲精品无码

服務熱線:13718308763 13718987307       E-mail:Tianyoubzwz@163.com
中國微生物菌種

標準物質查詢網
China microbial strains and
reference materials query network
會員登錄 會員注冊
我已閱讀并同意《服務協議》
注冊
斑點雜交
發布日期:2022-08-24 09:32:10


斑點雜交


斑點雜交(Dot blot)是將被檢標本點到膜上,烘烤固定。這種方法耗時短,可做半定量分析。一張膜上可同時檢測多個樣品,為使點樣準確方便,市售有多種多管吸印儀(Manifold),如MinifoldⅠ和Ⅱ、Bio-Dot(Bio-Rad)和Hybri-Dot,它們有許多孔,樣品加到孔中,在負壓下就會流到膜上呈斑點狀或狹縫狀。反復沖洗進樣孔,取出膜烤干或紫外線照射以固定標本,這時的膜就可以進行雜交。


(1)DNA斑點雜交:


①先將膜在水中浸濕,再放到15×SSC中。


②將DNA樣品溶于水或TE,煮沸5min,冰中速冷。


③用鉛筆在濾膜上標好位置,將DNA點樣于膜上,每個樣品一般點5μl(2~10μg DNA)。


④將膜烘干,密封保存備用。


(2)RNA斑點雜交:與上法類似,每個樣品至多加10μg總RNA(經酚/氯仿或異硫氰酸胍提取純化),方法是將RNA溶于5μlDEPC水,加5μl甲醛/SSC緩沖液(10×SSC中含6.15mol/L甲醛),使RNA變性,然后取5-8μl點樣于處理好的濾膜上,烘干。


(3)完整細胞斑點雜交:應用類似檢測細菌菌落的方法,可以對細胞培養物的特異序列進行快速檢測,將整個細胞點到膜上,經NaOH處理,使DNA暴露、變性和固定,再按常規方法進行雜交與檢測。有人曾用此法從105個培養細胞中檢測到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整細胞斑點印跡法可以用于篩選大量標本,因為它使細胞直接在膜上溶解,所以DNA含量甚至比常用的提取法還高,又不影響與32P標記的探針雜交,但它不適用于非放射性標記探針,因為DNA純度不夠,會產生高本底。




北京天優福康生物科技有限公司

官網:http://www.dhfpump.com/

服務熱線:400-860-6160 

聯系電話/微信:13718308763  

QQ:2136615612      3317607072

E-mailTianyoubzwz@163.com

主站蜘蛛池模板: 蓬莱市| 耿马| 大城县| 孟连| 尼勒克县| 晋宁县| 团风县| 余庆县| 都安| 定州市| 慈溪市| 连州市| 义马市| 连云港市| 老河口市| 五原县| 麦盖提县| 东源县| 邢台市| 石嘴山市| 南阳市| 长泰县| 孝昌县| 育儿| 札达县| 长汀县| 娄烦县| 鄂托克旗| 连南| 靖州| 卫辉市| 兴业县| 五河县| 盐亭县| 翁源县| 车险| 湖南省| 郑州市| 库伦旗| 罗定市| 左云县|