紙層析法氨基酸的分離鑒定原理與方法
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
掌握氨基酸紙層析的方法和原理，學(xué)會分析待
測樣品的氨基酸成分。
二、實(shí)驗(yàn)原理
紙層析是以濾紙為惰性支持物的分配層析。濾紙纖維上的羥基具有親水性，吸附一層水作為固定相，有機(jī)溶劑為流動(dòng)相。當(dāng)有機(jī)相流經(jīng)固定相時(shí)，物質(zhì)在兩相間不斷分配而得到分離。
溶質(zhì)在濾紙上的移動(dòng)速度用Rf值表示：
Rf=原點(diǎn)到層析斑點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)到溶劑前沿的距離
在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)。Rf值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)利用紙層析法分離氨基酸。
三、實(shí)驗(yàn)器材
（1）大燒杯（5000mL）：1只/組
（2）微量注射器（100mL）：1只/ 組。
（3）噴霧器：公用。
（4）培養(yǎng)皿：1只/組。
（5）層析濾紙（長22cm、寬14cm的新華一號濾紙）：1張/組。
（6）直尺、鉛筆：自備。
（7）電吹風(fēng)：1只/組。
（8）托盤、針、白線：1套/組。
（9）手套：1雙/組。
（10）塑料薄膜：公用。
（11）小燒杯：50mL，1只/組。
四、實(shí)驗(yàn)試劑
（1）擴(kuò)展劑：將4體積正丁醇和1體積冰醋酸放入分液漏斗中，與5體積水混合，充分振蕩，靜置后分層，棄去下層水層。
（2）氨基酸溶液：0.5%的已知氨基酸溶液3種（賴氨酸、苯丙氨酸、纈氨酸），0.5%的待測氨基酸液1種。
（3）顯色劑：0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。
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