細胞接毒的操作步驟
一、操作步驟
1.準備細胞：選擇適當的細胞系，培養并使其達到適當的生長狀態。
2.準備病毒：根據你需要的病毒和濃度，制備好病毒溶液，如腺病毒、逆轉錄病毒等。
3.接毒：當細胞長到合適密度時，就可以進行接種（建議在細胞傳代48h內進行接種，細胞密度達80-90%左右進行）。移除先前的培養液，用1×PBS洗2-3次，移除殘留的PBS，然后加入適當濃度的病毒溶液。一般接毒量按最后所需加入維持液體積的10%來計算，若希望病變速度快一些，可以加大接毒量，如15%或20%。輕輕旋轉或輕拍培養瓶以確保病毒溶液充分覆蓋細胞。
4.吸附：將接毒后的細胞在37℃,5%二氧化碳培養箱中靜置一定時間，使病毒充分接觸細胞。
5.收集病毒：收集病毒培養上清液，并進行病毒滴度測定。
6.細胞接種：將細胞接種于培養皿或板中，使其達到適當的細胞密度。
7.病毒感染：將適量的病毒加入培養皿或板中，與細胞進行感染。
8.孵育：將培養皿或板放入恒溫培養箱中，在37℃,5%二氧化碳培養箱中進行孵育。
9.收集樣本：根據實驗需要，在感染一定時間后，收集樣本進行后續分析。
二、注意事項
1.實驗室安全：在進行細胞接毒實驗時，應遵循實驗室的安全操作規范，戴好實驗手套、口罩和護目鏡，避免病毒接觸皮膚和黏膜。
2.病毒處理：病毒是一種生物安全風險，應在生物安全柜中進行操作，并采取適當的消毒措施，避免病毒泄漏。
3.細胞培養條件：細胞應在適當的培養條件下進行培養，包括適當的培養基、培養溫度和二氧化碳濃度等。
4.感染時間：病毒感染時間應根據實驗需要進行控制，過長或過短的感染時間都可能對實驗結果產生影響。
5.病毒滴度：為了確保實驗的準確性，應對病毒進行滴度測定，以確定感染細胞的適當病毒滴度。
6.實驗控制：為了排除其他因素對實驗結果的影響，應設置相應的對照組進行對比分析。
以上是細胞接毒的一般操作步驟及注意事項，具體操作還需根據實驗需求和實驗室條件進行調整。在進行實驗前，建議參考相關文獻和咨詢相關技術人員，并和導師進行討論后進行。
來源：藥物微生物檢驗-公眾號
