如何顯著提高凍存細胞復蘇成活率
一、提高凍存細胞復蘇成功率
1.使用適當的冷凍保護劑：常用的冷凍保護劑如二甲基亞砜（DMSO）能夠有效減少冰晶形成，保護細胞免受滲透壓變化的損害。
2.控制冷凍速率：堅持“慢凍快融”原則，使用梯度降溫盒或手動梯度降溫，將細胞以-1°C至-2°C/分鐘的速率降溫至-80°C，然后轉移至液氮中長期保存。
3.選用合適的冷凍容器：使用耐低溫的不易破裂的凍存管，確保其適合長期冷凍保存細胞。
4.細胞數量適量：凍存前避免細胞過度濃縮，以減小機械壓力。每個凍存管中的細胞數量不宜過少，便于復蘇到6cm皿或T25培養瓶中培養。
5.記錄詳細信息：在凍存管上清晰標記細胞類型、凍存日期和細胞密度，以便于稍后追蹤和使用。
6.避免反復凍融：凍存和復蘇過程中盡量避免反復凍結和解凍，以保持較高的細胞存活率。
7.復蘇時快速升溫：復蘇時，應迅速將凍存管從液氮中取出，并在37°C水浴中快速解凍，減少細胞在冰點附近的停留時間。
8.使用恰當的復蘇介質：復蘇細胞時，應使用與凍存時相同或相似的培養基，以維持細胞的生理狀態。
9.徹底去除凍存液：將解凍后的細胞用培養基稀釋，離心去除凍存液，然后用培養基重懸后繼續培養，以保護細胞并促進其健康復蘇。
二、凍存細胞復蘇步驟
① 棄去細胞培養基并PBS洗滌：先棄去培養基，然后用PBS緩沖液洗滌細胞一遍，確保去除殘留培養基。
② 胰酶消化：消化時間不宜過長，當觀察到部分細胞如流沙狀慢慢脫落時，可中止消化以避免過度影響細胞完整性。
③ 離心并重懸細胞：離心后，用移液槍吸去上清，然后用事先準備好的凍存液重新懸浮細胞。
④ 凍存液配方：常用比例為DMSO:血清=12:7或1:9。確保凍存液能有效保護細胞。
⑤ 標記凍存管：在凍存管上詳細標記細胞系、使用的培養基、凍存者姓名以及年份和日期，以便將來檢索和使用。
⑥ 使用程序降溫盒：使用程序降溫盒以緩慢降溫，能提升細胞存活率。建議將細胞在-80℃下保存24小時后再轉移至液氮中進行長期儲存。
文章來源：環凱（官網：huankai.com）
