一、目的
學(xué)習(xí)從牛乳中制備酪蛋白的原理和方法。
二、原理
牛乳中主要的蛋白質(zhì)是酪蛋白，含量約為35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白質(zhì)的混合物，等電點(diǎn)為4.7。利用等電點(diǎn)時溶解度最低的原理，將牛乳的pH調(diào)至4.7時，酶蛋白就沉淀出來。用乙醇洗滌沉淀物，除去脂類雜質(zhì)后，便可得到純的酪蛋白。
三、器材
1．牛奶
2．離心機(jī)
3．抽濾裝置
4．精密pH試紙或酸度計
5．電爐
6．燒杯
7．溫度計
四、 試劑
1．95%乙醇
2．無水乙醚
3. 0.2MpH4.7醋酸-醋酸鈉緩沖液
A液：0.2M醋酸鈉溶液
B液：0.2M醋酸溶液
稱有機(jī)純醋酸（含量大于99.8%）12.0g,定容至1000ml
4.去A液1770ml,B液1230ml混勻，即得pH4.7醋酸-醋酸鈉緩沖液。
5.乙醇乙醚混合溶液：乙醇:乙醚=1:1（V/V）
五、操作
1.將100牛奶加熱到4℃。邊攪拌邊緩緩加入預(yù)熱至40℃的緩沖液，并調(diào)節(jié)pH之后，冷卻至室溫。以3000r/min離心10min。棄去上清液，得酪蛋白粗制品。
2.用水洗滌三次，3000r/min離心，棄去上清液。
3.在沉淀中加入乙醇，攪拌片刻，將全部懸濁液轉(zhuǎn)移至布氏 漏斗 中抽濾。用乙醇-乙醚混合液沉淀兩次，最后再用乙醚沉淀兩次，抽干。
4.將沉淀攤開在表面皿上，干燥后得酪蛋白純品。
5.準(zhǔn)確稱量后，計算含量，并與理論含量（3.5g/100ml）相比求出實際得率。酪蛋白含量g/100ml：牛乳(g%)
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