抗管蛋白免疫染色法

原理

細胞骨架微管的主要成分主要為管蛋白（Tublin），用免疫熒光法能顯出其清晰結(jié)構(gòu)。

材料與儀器

細胞
PBS 丙酮 甲醛
碟皿 恒溫箱

步驟

1.  細胞培養(yǎng)
用支持物細胞培養(yǎng)法，把細胞培養(yǎng)在小蓋片上；

2.  漂洗
用鑷子挾出小蓋片，在溫PBS中漂洗3 次，每次30 秒；

3.  固定
在室溫中用PBS配的3 %甲醛液固定20 分鐘；

4.  漂洗
從固定液中取出，仍用溫PBS漂洗3 次，每次1 分鐘，最后在濾紙上吸干多余的PBS；

5.  過丙酮
投入冷丙酮中（－10 ℃～－20 ℃），令細胞面向上，作用7 分鐘；

6.  漂洗：
同4；

7.  抗體處理
取一直徑6 厘米干凈的碟皿，向皿中央滴1 滴濃度為0.1～0.2 mg/ml的一級抗管蛋白抗體，令小蓋片細胞面向下扣在抗體液上，覆以皿蓋，置37 ℃溫箱中45 分至1 小時（內(nèi)有水盒以避免抗體液蒸發(fā)干掉）；

8.  漂洗
向碟皿內(nèi)徐徐滴加PBS，令蓋片浮起在液面，用鑷子挾出，按4處理；

9.  二級熒光抗體處理
按7進行（熒光抗體常用羊抗兔抗體）；

10.  漂洗
按8和4處理，封片；取一大載物片，用濾紙剪一紙框置于載物片上向紙框中滴甘油/PBS（pH8.5，PBS 1 分加甘油9 分）少許，把小蓋片置入框中再覆以大蓋片；置熒光顯微鏡下觀察。

注意事項

熒光抗體有市售品，如無，也可參閱免疫學(xué)技術(shù)自制。