DNS（二硝基水楊酸）比色法還原糖含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)
還原糖的測(cè)定實(shí)驗(yàn)是生化技術(shù)中基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，是生化課程中必須掌握的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)，不明白還原糖的測(cè)定原理、測(cè)定方法？本文羅列了DNS還原糖含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理、步驟、DNS試劑的制備、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、樣品的測(cè)定。
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/span>
DNS(二硝基水楊酸)比色法還原糖含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和了解還原糖和總糖測(cè)定的基本原理、比色法測(cè)定還原糖的操作步驟和分光光度計(jì) 的使用方法。
二、實(shí)驗(yàn)原理
還原糖的測(cè)定是糖定量測(cè)定的基本方法。
還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類。單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，例如乳糖和麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。利用各種糖的溶解度不同，可將植物 樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來(lái)。對(duì)非還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成還原性單糖進(jìn)行測(cè)定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量(常以葡萄糖含量計(jì))。
還原糖在堿性條件下加熱可被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，而氧化劑3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，利用分光光度計(jì)在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由于多糖水解為單糖時(shí)，每斷裂一個(gè)糖苷鍵需加入一分子 水，所以在計(jì)算多糖含量時(shí)應(yīng)乘以系數(shù)0.9。
三、DNS試劑的制備
將6.3克DNS和262ml 2mol/L氫氧化鈉，加到500ml含有182克酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加上5克重苯酚和5克亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻后加水定容到1000ml，即制成3,5-二硝基水楊酸試劑，貯于棕色瓶中備用。
四、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
分別取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(1mg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于25 ml試管中，分別準(zhǔn)確加入DNS試劑2ml，沸水浴加熱2min，流水冷卻，用水補(bǔ)足到15ml刻度。在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。
五、樣品的測(cè)定
樣品液適當(dāng)稀釋，使糖濃度為0.1-1.0mg/ml，取稀釋后的糖液1.0ml于15ml刻度試管中，加DNS試劑2.0ml，沸水煮沸2min，冷卻后用水補(bǔ)足到15ml刻度，在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。從標(biāo)準(zhǔn)曲線查出葡萄糖mg/ml數(shù)。求出樣品中糖含量。
為生化實(shí)驗(yàn)報(bào)告發(fā)愁的同學(xué)，不妨看看這篇文章，希望對(duì)大家有用。其實(shí)最主要的是要熟知DNS還原糖含量測(cè)定原理，至于實(shí)驗(yàn)試劑配制、操作步驟，這些都大同小異，機(jī)械式的操作。只有掌握了原理才能明白為什么要這樣做，操作中必須注意的事項(xiàng)。
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